[發明專利]一種用于培養人淋巴細胞的培養試劑

在審

• 申請號: 201610196326.5
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN105713877A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 趙玲玲
• 申請（專利權）人: 趙玲玲
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0781
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所 43205
• 代理人: 許伯嚴

技術領域

本發明屬于細胞培養領域，具體涉及一種用于培養人淋巴細胞的培養試劑。

背景技術

有效的細胞免疫治療離不開在體外大量培養、擴增和活化淋巴細胞。這其中使用量最大的試劑就是培養基。培養基為淋巴細胞的生長提供了基本的環境，包括為淋巴細胞存活提供適宜的滲透壓，PH值，為淋巴細胞的生長提供了一切所需的營養因子，包括無機鹽、氨基酸、功能性的蛋白、維生素等，也是淋巴細胞各種代謝產物的排放場所。傳統的培養基為了提供這些營養因子，大多采用動物或人的血清及其組分作為添加物，比較常見的有新生牛血清、胎牛血清、人AB血清、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、人轉鐵蛋白等。使用動物血清的優點是有足夠的量供應，價格便宜，但是使用動物血清的缺點是有潛在傳播傳染病的風險，以及由于異種蛋白導致過敏癥的發生，而且動物血清并不能很好的支持人淋巴細胞的生長。而使用人AB血清的好處是可以很好的支持人淋巴細胞的生長，但是人AB血清來源困難，供應量有限，而且也存在傳播傳染病的風險。

現有商品化無血清淋巴細胞培養基大都添加有人血白蛋白、人轉鐵蛋白等人源性組分。由于這些組分來源于人的血清，雖然有各種病原體的檢測技術和消毒技術，但仍然避免不了傳播疾病的風險；由于來源于不同的供者，造成批次間差異，不利于質量的控制。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種能高效擴增人淋巴細胞的培養試劑，該培養基不采用動物或人的血清及其組分作為添加物，降低了傳播疾病的風險，同時可以保證不同批次質量的均一性。

本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：

用于培養人淋巴細胞的培養試劑，包括基礎培養基，還包括血清替代物和擴增促進劑；

所述血清替代物包括重組人血白蛋白、重組人轉鐵蛋白和重組人胰島素，還包括脂質、微量元素化合物和維生素；所述脂質包括膽固醇、亞油酸、亞麻酸，所述微量元素化合物包括硝酸鐵、亞硒酸鈉、硫酸銅和硫酸鋅；

所述擴增促進劑為化合物SchinlignanF。

進一步地，所述重組人血白蛋白的濃度為5mg/L～20mg/L。

進一步地，所述重組人轉鐵蛋白的濃度為40mg/L～80mg/L。

進一步地，所述重組人胰島素的濃度為10mg/L～40mg/L。

進一步地，所述膽固醇濃度為0.5mg/L～2.5mg/L，亞油酸濃度為0.2mg/L～0.4mg/L，亞麻酸濃度為0.3mg/L～0.5mg/L。

進一步地，微量元素化合物中的硝酸鐵濃度為0.2mg/L～0.4mg/L，亞硒酸鈉濃度為0.1mg/L～0.2mg/L，硫酸銅濃度為0.1mg/L～0.2mg/L，硫酸鋅濃度為0.3mg/L～0.7mg/L。

進一步地，所述維生素包括維生素E，維生素E濃度為4mg/L～8mg/L。

進一步地，化合物SchinlignanF的濃度為5mg/L～15mg/L。

進一步地，所述基礎培養基為RPMI1640培養基。

進一步地，所述基礎培養基中添加1～3％體積百分含量的自體血清。

本發明的優點：

本發明提供的培養試劑能高效擴增人淋巴細胞，且殺瘤活性強。

具體實施方式

下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。

本發明化合物SchinlignanF的制備方法參見文獻：Isolationandanti-hepatitisBvirusactivityofdibenzocyclooctadienelignansfromthefruitsofSchisandrachinensis,Phytochemistry,116(2015),253-261。

實施例1：培養試劑組成

每1LRPMI1640培養基中加入重組人血白蛋白10mg，重組人轉鐵蛋白60mg，重組人胰島素25mg，膽固醇1.5mg，亞油酸0.3mg，亞麻酸0.4mg，硝酸鐵0.3mg，亞硒酸鈉0.15mg，硫酸銅0.15mg，硫酸鋅0.5mg，維生素E6mg，化合物SchinlignanF10mg，慶大霉素10IU，攪拌使充分溶解，調節pH值為6.8～7.2之間，0.1μm濾膜過濾除菌，分裝。

實施例2：實施例1的對比，不添加擴增促進劑SchinlignanF