[發(fā)明專利]檢測豬繁殖與呼吸障礙綜合癥病毒的引物、試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610195105.6
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105648119B
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發(fā)明（設計）人: 王東東;宋延華;潘永飛;李春梅;葉敏慧;歐陽海平;蔡新斌;盧圍
• 申請（專利權）人: 溫氏食品集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州容大專利代理事務所(普通合伙) 44326
• 代理人: 劉新年

本發(fā)明公開了一種檢測豬繁殖與呼吸障礙綜合癥病毒的引物、試劑盒及方法。所述引物如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述方法為以待檢測樣品的RNA為模板，進行RT?PCR擴增反應，電泳鑒定。本發(fā)明的檢測豬呼吸與繁殖障礙綜合癥病毒的引物具有很高的特異性和靈敏度，能夠檢測出豬繁殖與呼吸障礙綜合癥的新型病毒類NADC30病毒；PCR擴增可以通過擴增片段的大小不同快捷的對PRRSV的經典株、變異株和類NADC30毒株這3類毒株進行鑒別區(qū)分，省去測序的步驟，節(jié)省了時間和成本，操作簡單、實用。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學技術領域，更具體地，本發(fā)明涉及一種檢測豬繁殖與呼吸障礙綜合癥病毒的引物、試劑盒及方法。

背景技術

豬藍耳病是由豬繁殖與呼吸障礙綜合癥病毒(Porcine Reproductive andRespirary Syndrome Virus,PRRSV)感染引起的，以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸衰竭為主要癥狀的傳染病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為母豬流產、早產、死胎、木乃伊胎、仔豬成活率下降和育成豬呼吸道癥狀等。該病于1987年在美國首次出現(xiàn)，隨后在世界各地迅速蔓延。

豬繁殖與呼吸綜合癥(PRRS)對養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的影響，特別是北美和歐洲近年來呈現(xiàn)全球蔓延的趨勢，主要有母豬流產、生長期豬肺炎和仔豬死亡率增加等癥狀，因豬耳朵呈藍紫狀，因此也被稱為豬藍耳病。在我國新出現(xiàn)一種高致病性藍耳病，除了傳統(tǒng)癥狀外還可見體溫明顯升高，達41℃以上，皮膚發(fā)紅、部分豬耳朵出血、淤血呈紫紅色等癥狀，在一個地區(qū)流行數(shù)月無明顯好轉，常規(guī)療法無效。

在1990年，美國的11個州和加拿大的11個州檢測到這種病毒。接著1990年在德國的明斯特地區(qū)發(fā)現(xiàn)報道，并且迅速的蔓延到德國的其它地區(qū)，這種病當時在德國被稱為豬感染晚期流產病(SSS)和地方流行性后期流產病(ESS)。其后在歐洲的其它國家(荷蘭，法國，比利時，英格蘭和丹麥)相繼出現(xiàn)。1990年晚期在北歐的豬場診斷出超過5000頭患有此病的豬。盡管這種疾病沒有在意大利、波蘭、瑞士和澳大利亞報道過，但是在意大利和波蘭的豬群中用抗體檢測出PRRSV。

這種疾病對經濟的影響重大，造成了20-30％的豬死胎，每窩仔豬中損失1.5-2.0只豬。在此疾病爆發(fā)時每頭母豬上的損失達到250-500美元。在衣阿華州的一份報道中，100英里內的農場中有85,330只死亡，并且造成1060萬美元的損失。在西班牙，當PRRS第二次流行時有近3000頭豬被屠宰。2006年在中國發(fā)現(xiàn)高致病性PRRSV(HP-PRRSV)，影響了超過2000000頭豬。這種病毒對所有年齡段的豬都有影響，癥狀主要是高燒(高于41℃)、高致病率(50-100％)、高死亡率(20-100％)。從2006年到2009年在中國的不同省份分離出了一大批HP-PRRSV，并且和這種疾病的爆發(fā)相吻合。

2015年，有學者報道在中國大陸出現(xiàn)一種新的類NADC30毒株。該類型毒株毒力較強，造成爆發(fā)母豬流產、死胎以及仔豬呼吸道疾病(死亡率可達30％-50％)(Zhou L,WangZ,Ding Y et al.NADC30-like Strain of Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome Virus,China[J].Emerg Infect Dis.2015Dec；21(12):2256-2257.)。另外有學者通過實驗發(fā)現(xiàn)新出現(xiàn)的NADC30類毒株具有一定毒力，并且應用目前的防控措施較難控制(Zhao K,Ye C,Chang XB et al.Importation and Recombination Are Responsible forthe Latest Emergence of Highly Pathogenic Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus in China[J].J Virol.2015Oct 15；89(20):10712-6.)。