[發(fā)明專利]LIM2基因在檢測先天性CCMC中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610191700.2
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105603114A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 代云海;陳鵬;王殿強;郝曉丹
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省眼科研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因診斷與產(chǎn)前基因診斷的相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及晶狀體內(nèi) 膜蛋白2(LIM2)在制備檢測先天性白內(nèi)障-小角膜綜合征(CCMC)基因診斷制品 中的應(yīng)用。

發(fā)明背景

先天性白內(nèi)障是導(dǎo)致兒童低視力和致盲的常見眼病，發(fā)病率約為 0.01％～0.06％，其中約50％與遺傳有關(guān)，其遺傳方式以常染色體顯性遺傳最為常 見。先天性白內(nèi)障可獨立發(fā)生，也可作為眼部或全身綜合征的伴發(fā)癥狀，其中 12％-18％的先天性白內(nèi)障患者常發(fā)生合并小角膜癥狀。白內(nèi)障-小角膜綜合征 (Cataract-microcorneasyndrome,CCMC,OMIM116200)是一種先天發(fā)育異常性 眼病，常累及雙眼，表現(xiàn)為不同表型的白內(nèi)障及角膜橫徑小于10mm，常伴發(fā)眼 前節(jié)發(fā)育不良，如虹膜缺損、Peters異常、瞳孔異位及眼球震顫等，這些多發(fā)畸 形常使大多數(shù)患者喪失視力，是先天性致盲的重要原因之一。并且和單純先天 性白內(nèi)障相比，伴發(fā)小角膜的患者更易患青光眼，并造成不可逆轉(zhuǎn)的視覺損害。 目前對于CCMC治療手段有限、致盲率很高，給全社會帶來沉重的經(jīng)濟負擔(dān)。

先天性CCMC的病因及病理機制尚不清楚，目前世界上研究較少。國內(nèi)外 的遺傳學(xué)研究結(jié)果表明該病很大程度上是由于遺傳因素導(dǎo)致的。迄今為止，已 有7個致病基因被證實(詳見表1)。

表1：白內(nèi)障-小角膜綜合征致病基因定位及克隆情況

CCMC具有顯著的遺傳異質(zhì)性，存在多個候選致病基因。到目前為止對 CCMC的致病基因的了解仍然有限，迄今為止7個已知基因僅能解釋不到30％ 的患者的發(fā)病。這已經(jīng)成為CCMC的發(fā)病機制的研究以及針對病因的診斷和治 療研究的瓶頸。這種現(xiàn)狀促使進一步去發(fā)現(xiàn)和了解該病新的致病基因，為后續(xù) 的基因診斷、產(chǎn)前診斷及基因治療提供基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種LIM2基因在制備檢測先天性白內(nèi)障-小角膜綜合征 (CCMC)診斷制品中的應(yīng)用，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。

申請人發(fā)現(xiàn)了一個3代呈常染色體顯性遺傳的CCMC家系，經(jīng)過候選基因 測序，排除了已知的7個候選基因突變致病的可能；同時，進一步對該家系的 核心成員進行了外顯子組測序，找到了該家系的致病基因晶狀體內(nèi)膜蛋白2 (LIM2)，從而促成了本發(fā)明。

本發(fā)明首先提供LIM2基因新的用途，是在制備用于檢測先天性白內(nèi)障-小 角膜綜合征(CCMC)診斷制品中的應(yīng)用；

本發(fā)明還提供一種用于檢測先天性白內(nèi)障-小角膜綜合征(CCMC)的引物對， 所述的引物對的上下游引物序列為SEQIDNO:1-10，其引物信息如下：

本發(fā)明還提供一種用于檢測先天性白內(nèi)障-小角膜綜合征(CCMC)的試劑盒， 包含有上述的引物對中的任一種或幾種。

本發(fā)明還提供一種與先天性白內(nèi)障-小角膜綜合征(CCMC)疾病相關(guān)的SNP 位點,為LIM2基因編碼區(qū)域由起始密碼子起第68位,其堿基為T或G；

本發(fā)明提供了LIM2基因的新的用途，從而提供了一種有效的進行先天性 CCMC疾病基因診斷、產(chǎn)前基因篩查及遺傳咨詢的途徑，應(yīng)用效果表明本發(fā)明 所提供的基因的SNP位點及檢測引物可以有效的用于臨床患者及胎兒絨毛或羊 水進行LIM2基因突變位點的快速檢測。

具體實施方式

本發(fā)明的申請人在一個先天性的CCMC家系中發(fā)現(xiàn)LIM2基因的突變位點 從而促成了本發(fā)明。

LIM2基因由8052個核苷酸堿基組成，位于19q13.41，可轉(zhuǎn)錄成大約875bp 的mRNA(NM_001161748.1)，直接翻譯形成173個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細的描述。

實施例1：從先天性CCMC家系中篩選LIM2基因的突變位點

1、提取外周血基因組DNA：

在符合國家相關(guān)政策規(guī)定，并在取樣對象同意的基礎(chǔ)上，抽取第一個家系 成員外周靜脈血2-5ml，放入EDTA抗凝管內(nèi)，-80℃凍存?zhèn)溆茫粌龃娴腅DTA 抗凝血在室溫融化后，取500μL放于離心管，加入等體積TE(pH8.0)，混勻， 4℃，10000rpm離心10分鐘，棄上清。