[發明專利]重組人胰島素基因工程菌高表達株篩選培養基及制備方法

有效

• 申請號: 201610191683.2
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105695385B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 冷春生;李一奎;王明焱;周芳;常曉慧
• 申請（專利權）人: 通化東寶藥業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京遞進知識產權代理事務所(特殊普通合伙)11414
• 代理人: 田豐,王凱

1.一種重組人胰島素基因工程菌高表達株篩選培養基，其特征在于，所述培養基，以1升為計量單位，各組分及其質量分別為：蛋白胨1.5-3g、酵母粉3-6g、磷酸二氫鉀1.5-3.5g、磷酸氫二鈉4.5-6.5g、氯化鈉0.3-0.6g、氯化銨0.1-0.3g，抗生素30-60mg,調pH至6.80-7.20，余量為純化水。

2.如權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述培養基，以1升為計量單位，各組分及其質量分別為：蛋白胨2g、酵母粉5g、磷酸二氫鉀2.5g、磷酸氫二鈉5g、氯化鈉0.5g、氯化銨0.2g，抗生素35-50mg，調pH至7，余量為純化水。

3.如權利要求1-2所述的任一培養基，其特征在于，所述抗生素為卡那霉素。

4.如權利要求3所述的培養基，其特征在于，所述卡那霉素為40mg。

5.一種培養基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)配制1升培養基，精確稱取蛋白胨1-3g、酵母粉2-8g、磷酸二氫鉀1-5g、磷酸氫二鈉3-8g、氯化鈉0.1-0.8g、氯化銨0.1-0.5g，加入純化水至1升體積的85-90％，調節pH至6.50-7.50，然后使用純化水進行定容，高壓蒸汽滅菌；

2)等到培養基冷卻后，無菌環境下，加入無菌卡那霉素至終濃度為20-80mg/L，得到所述篩選培養基。

6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)配制1升培養基，精確稱取蛋白胨1.5-3g、酵母粉3-6g、磷酸二氫鉀1.5-3.5g、磷酸氫二鈉4.5-6.5g、氯化鈉0.3-0.6g、氯化銨0.1-0.3g，加入純化水至1升體積的85-90％，調節pH至6.80-7.20，然后使用純化水進行定容，高壓蒸汽滅菌；

2)等到培養基冷卻后，無菌環境下，加入無菌卡那霉素至終濃度為30-60mg/L，得到所述篩選培養基。

7.如權利要求5或者6所述的制備方法，其特征在于，高壓蒸汽程序為121℃滅菌30分鐘。

8.如權利要求5或者6所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中培養基冷卻至30-40℃。

9.一種權利要求1所述微生物篩選培養基在重組人胰島素基因工程菌高表達株篩選中的應用。