[發明專利]一種甘薯胚性愈傷組織再生的方法

在審

• 申請號: 201610189940.9
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN107278886A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 周志林;唐君;曹清河;張安;趙冬蘭;孫書軍;項彩云
• 申請（專利權）人: 江蘇徐淮地區徐州農業科學研究所（江蘇徐州甘薯研究中心）
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種組織培養改良技術，具體是一種甘薯胚性愈傷組織再生的方法。

背景技術

植株再生是進行遺傳轉化的前提，提高胚性愈傷組織再生率將有助于利用基因工程進行作物遺傳改良。甘薯組織培養高頻率植株再生是進行甘薯遺傳轉化的重要一步。一般認為，甘薯植株再生比較困難。截至目前，前人研究表明胚性愈傷組織再生率為50-60%，個別品種可以達到90%，平均單塊愈傷再生植株2株；為加快通過甘薯體細胞雜交及基因工程進行甘薯遺傳改良，胚性愈傷再生率還有待進一步提高，基因型還需進一步拓寬，以及單塊愈傷的再生植株數還需提高。

發明內容

本發明提供一種甘薯胚性愈傷組織再生的方法，通過利用這一再生方法，較當前主要培養方法培養的胚性愈傷組織再生率可以提高10%以上，并且拓寬了基因型范圍，單塊愈傷的植株再生數可達8-10株，顯著提高了胚性愈傷再生率和單塊愈傷出苗量。

本發明是通過如下技術方案實現的：一種胚性愈傷組織再生的方法，將經過繼代培養的胚性愈傷組織，挑選色澤鮮亮、長勢較好的接種于分化培養基；接種于分化培養基后，于28±1℃，光照10 小時/天條件下培養15天；然后將培養的胚性愈傷轉移至再生培養基中，繼續培養；挑選再生的子葉胚或者再生小植株接種于低滲培養基，完成植株再生

所述的挑選經過繼代、色澤鮮艷、長勢較好的胚性愈傷組織接種于分化培養基，MS基本培養基+ABA 1mg/L+ZT 1.0 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L，滅菌前調PH：5.8-6.0；進行培養的，這一配方是在前期大量預試驗及基礎工作基礎上，積極引進ZT，同ABA協同作用，可以顯著提高胚性愈傷組織再生率。

所述的接種于分化培養基培養15天后，將其轉入再生培養基（MS基本培養基+ZT 0.5 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L）繼續培養，而前人的操作是直接轉入MS培養基，相對于前人方法，本方法可以顯著提高單塊愈傷出苗量，無需離體繁殖，一次性可以獲得足夠基礎再生苗。

所述的將再生的子葉胚或再生小植株轉入低滲培養基（MS基本培養基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L），就是為了促進子葉胚的快速萌發，以及再生植株的快速生根，為獲得壯苗奠定基礎。

本發明的有益效果是：通過這一再生方法，可顯著促進體細胞胚的發育，獲得較多子葉胚及再生植株，胚性愈傷組織再生率提高了10%以上，單塊愈傷再生植株數顯著增加，該方法重復性好，便于操作；這一再生技術的改進，將有助于優異基因的利用，促進甘薯遺傳改良。

具體實施方式

下面結合實施例進一步說明本發明的方法和效果，但不限制本發明的保護范圍。

實施例1

1.試驗材料和方法

1.1試驗材料：甘薯品種：商薯19

1.2試驗方法：所選試驗材料為繼代培養的商薯19胚性愈傷，挑選色鮮艷、狀態較好的接種于分化培養基（MS基本培養基+ABA 0-2 mg/L+ZT 0-1.5 mg/L+蔗糖 30g/L+ Phytagel 2.5g/L，滅菌前調PH：5.8-6.0），培養15d，促進體細胞胚胎發育；而后將其轉入再生培養基中（MS基本培養基+ZT 0-1.0 mg/L+蔗糖 30 g/L+ Phytagel 2.5g/L，滅菌前調PH：5.8-6.0）培養；挑選發育的子葉胚獲再生小植株接種于低滲培養基（MS基本培養基+蔗糖 20g/L+ Phytagel 2.5g/L）。每個重復接種20塊胚性愈傷，設三次重復。培養條件為：（28±1）℃，日光燈冷光源強度為2400Lux。

調查及數據統計：培養30 d后，統計植株再生率和單塊愈傷成苗數。

結果與分析

2.1不同分化培養基對胚型愈傷組織再生的影響

在分化培養基培養15 d，轉入低滲培養基，再培養30 d后，胚性愈傷已分化出子葉胚，甚至小植株，具體結果見表1：與對照相比，分化培養基中添加ABA、ZT均有助于植株再生；尤其，ABA和ZT的相互作用可以有效促進植株再生；在本試驗中，添加ABA1mg/L和ZT 1mg/L植株再生率最高，達85.0%，

表1：不同分化培養基對植株再生率的影響