[發明專利]一種獲取碭山酥梨外植體及提高組培苗成活率的方法

有效

• 申請號: 201610189333.2
• 申請日: 2016-03-28
• 公開（公告）號: CN105766584B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 張金云;蔡永萍;金青;程曦;馬晨輝;李姝妹;程俊;閆沖沖;李國慶;孫寧
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01G31/00
• 分類號: A01G31/00;A01H4/00;A01G2/35
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 王偉

本發明公開了一種碭山酥梨外植體及提高組培苗成活率的方法，選擇田間生長健壯、芽體飽滿無病蟲害的一年生中庸枝，通過人工培養獲得5㎝?10㎝的“新稍”，將其作為組培的外植體，然后再將該外植體經消毒及預處理、誘導培養、增殖分化培養、接穗培養和嫁接等步驟獲得碭山酥梨種苗。本發明方法簡單，充分利用冬季修剪去除的將丟棄的枝條。通過本發明人工方式獲得大量“新稍”，提供組培所需足夠的外植體，可進行碭山酥梨工廠化快速繁殖脫毒的優良種苗；且本發明組培方法成活率達96％。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，尤其涉及一種梨組織培養的外植體獲取及提高組培苗成活率的組培方法，具體說是在10月-翌年2月獲取碭山酥梨外植體及提高碭山酥梨組培苗成活率的方法。

背景技術

碭山酥梨原產安徽省碭山縣，至今有2000多年的歷史。碭山酥梨耐鹽堿、耐瘠薄、耐貯藏、酥脆多汁等等綜合性狀優良，至今無其他品種替代。目前，僅碭山酥梨這一個品種的栽培面積仍占全國梨生產總面積20％以上，但在長期的無性繁殖過程中，感染并積累了多種病毒，嚴重影響梨果的產量和質量；隨著分子生物學領域技術迅猛發展，利用基因工程進行種質改良研究也進一步深入。無論是種苗脫毒純化或利用基因工程進行種質改良研究等，都需要進行大量的碭山酥梨組織培養，而外植體的選擇是組織培養的第一步，選材的部位、時期等都會影響到外植體的成活率。梨的組織培養分為莖尖培養、莖段培養、胚培養、花藥培養和葉片培養，考慮到成活率、取材是否容易以及生產成本等諸多因素，目前在梨的組織培養中應用比較廣泛的是采取旺盛生長的新梢作為外植體，取其莖尖作接種材料培養，由于此期外植體的酚類物質積累較少，多酚氧化酶活性弱，外植體不容易褐化，成活率最高。

碭山酥梨是落葉果樹，具有符合自身特性的品種物候期，其新梢旺盛生長期一般在4月上旬至5月上旬，到6月中旬基本停止生長，進入10月份以后，碭山酥梨葉柄開始形成離層而開始脫落，已經沒有新萌發的新稍。因此，在生產上或實驗室所需組培，一般只能在每年的4月上旬至5月上旬能獲得大量優良外植體，滿足當季組培需要。而碭山酥梨在組培時增殖倍數較低，一般不超過3倍，并且最多繼代培養6代，否則影響其生長勢和成活率。也因此，無論利用基因工程進行種質改良研究或碭山酥梨規模化種苗繁殖等，不能周年提供足夠的組培苗嚴然已成為產業發展的瓶頸。

本項目組經10余年反復試驗研究，終于獲得一種方法，能在10月-翌年2月份獲得大量的組培外植體，獲得當期充足的組培苗，并能充分利用冬季修剪去除的將丟棄的枝條，操作簡單，并且能提高碭山酥梨組培苗成活率。

發明內容

本發明的目的是提供一種在10月-翌年2月通過人工培養獲取碭山酥梨外植體的方法以及基于該外植體提高碭山酥梨組培苗成活率的組培方法。

本發明解決技術問題采用如下技術方案：

在10-12月份獲得碭山酥梨組培外值體的方法，其特點在于，

S1、在10-12月份，選擇田間生長健壯、芽體飽滿無病蟲害的一年生中庸枝，若還存有少部分葉片未脫落的，人工將其上面的葉片剪去，留葉柄；用清水沖洗干凈,將枝條基部下端呈45℃剪去1㎝～2㎝，立即插入盛水2㎝～4㎝深的玻璃器皿中，置入溫度5℃～7℃環境條件中處理7d～10d，每隔2d換水1次，每次換水同時將枝條基部下端呈45℃剪去1㎝，最后將枝條再沖洗一遍，再用濕沙布包裹待處理；

S2、在翌年元月-2月份，結合冬季梨樹修剪，將剪除廢棄的枝條拾回，剪成小于60㎝的段，最佳是選取一年生中庸枝，用清水沖洗干凈,再用濕沙布包裹待處理。