[發明專利]七重PCR快速篩查檢測商業化應用轉基因油菜的引物及檢測方法

在審

• 申請號: 201610189016.0
• 申請日: 2016-03-29
• 公開（公告）號: CN105713977A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 尹全;李憶;宋君;張富麗;劉勇;雷紹榮;郭靈安;王東;劉文娟;常麗娟
• 申請（專利權）人: 四川省農業科學院分析測試中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224
• 代理人: 趙正寅

1.七重PCR快速篩查檢測商業化應用轉基因油菜的引物，其特征在于，包括以下引物序列：

pat-F：5'-CGCGGTTTGTGATATCGTTAAC-3'；

pat-R：5'-TCTTGCAACCTCTCTAGATCATCAA-3'；

CruA-F：5'-GGCCAGGGCTTCCGTGAT-3'；

CruA-R：5'-CTGGTGGCTGGCTAAATCGA-3'；

P-FMV35S-F：5'-CAGCATTCCAGATTGGGTTCA-3'；

P-FMV35S-R：5'-CTTTTGGCTAATGGTTTGGAGAC-3'；

T-NOS-F：5'-GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3'；

T-NOS-R：5'-TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'；

P-CaMV35S-F：5'-GCTCCTACAAATGCCATCATTGC-3'；

P-CaMV35S-R：5'-GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC-3'；

CP4-EPSPS-F：5'-GACTTGCGTGTTCEGGCTT-3'；

CP4-EPSPS-R：5'-AACACCGTTGAGCTTGAGA-3'；

bar-F:5'-GAAGGCACGCAACGCCTACGA-3'；

bar-R:5'-CCAGAAACCCACGTCATGCCA-3'。

2.七重PCR快速篩查檢測商業化應用轉基因油菜的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）合成以下引物：

pat-F：5'-CGCGGTTTGTGATATCGTTAAC-3'；

pat-R：5'-TCTTGCAACCTCTCTAGATCATCAA-3'；

CruA-F：5'-GGCCAGGGCTTCCGTGAT-3'；

CruA-R：5'-CTGGTGGCTGGCTAAATCGA-3'；

P-FMV35S-F：5'-CAGCATTCCAGATTGGGTTCA-3'；

P-FMV35S-R：5'-CTTTTGGCTAATGGTTTGGAGAC-3'；

T-NOS-F：5'-GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3'；

T-NOS-R：5'-TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'；

P-CaMV35S-F：5'-GCTCCTACAAATGCCATCATTGC-3'；

P-CaMV35S-R：5'-GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC-3'；

CP4-EPSPS-F：5'-GACTTGCGTGTTCEGGCTT-3'；

CP4-EPSPS-R：5'-AACACCGTTGAGCTTGAGA-3'；

bar-F:5'-GAAGGCACGCAACGCCTACGA-3'；

bar-R:5'-CCAGAAACCCACGTCATGCCA-3'；

（2）制備待測DNA稀釋液；

（3）配制PCR反應體系；

（4）進行PCR檢測；

（5）取PCR反應產物進行毛細管電泳。

3.根據權利要求2所述的七重PCR快速篩查檢測商業化應用轉基因油菜的方法，其特征在于，步驟（1）中pat引物的濃度為0.3μmol/L，CruA引物的濃度為0.05μmol/L，P-CaMV35S引物和bar引物的濃度為0.15μmol/L，CP4-EPSPS引物的濃度為0.25μmol/L，P-FMV35S引物和T-NOS引物的濃度均為0.2μmol/L；步驟（2）所述制備的DNA稀釋液的濃度為50ng/μL。

4.根據權利要求2或3所述的七重PCR快速篩查檢測商業化應用轉基因油菜的方法，其特征在于，所述PCR反應條件為：94℃變性5min；然后進入35個循環，94℃30s，56℃30s，72℃30s；循環結束后72℃延伸3min。

5.根據權利要求4所述的七重PCR快速篩查檢測商業化應用轉基因油菜的方法，其特征在于，引物退火溫度為58℃。