[發明專利]一種右旋糖酐酶凍干粉的工業化生產方法

在審

• 申請號: 201610188580.0
• 申請日: 2016-03-29
• 公開（公告）號: CN105713887A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 王京光;魏哲;王長海;李曉蕓;陳忠
• 申請（專利權）人: 山東金朗生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/46
• 分類號: C12N9/46;C12R1/645
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 徐槐

1.一種右旋糖酐酶凍干粉的工業化生產方法，步驟如下：

(1)一代斜面的制備

將菌株接種到一代斜面培養基上進行一代斜面培養，在28℃，濕度為40-60％的條件下培養6-7天；

(2)二代斜面的制備

將一代斜面培養基上活化的菌株接種到二代斜面培養基上進行二代斜面培養，在28℃，濕度為40-60％的條件下培養6-7天；

(3)種子培養

將二代斜面培養的菌株制作菌懸液，按1.5-2％(體積比)的量接種入種子培養基中，開啟攪拌轉速80轉/min、在27-29℃條件下培養30-40h；

(4)發酵培養

將種子液按1.5-2％(體積比)的量接種入發酵培養基中，在27-29℃，轉速為80轉/min的條件下培養85-100h。

培養基

一代斜面培養基：蔗糖1.5g、馬鈴薯20g、瓊脂2g，加水定容至100mL。

二代斜面培養基：蔗糖1.5g、馬鈴薯20g、瓊脂2g，加水定容至100mL。

種子培養基：酵母浸粉5-10g/L,磷酸氫二鉀2-4g/L，硫酸鎂0.2-0.5g/L,氯化鉀0.1-0.3g/L，右旋糖酐大分子100010-15g/L，硫酸亞鐵0.005-0.01g/L，甜菜堿消沫劑0.001-0.005g/L，磷酸氫二鈉0.005-0.01g/L，其余為自來水。

發酵培養基：酵母浸粉10-15g/L,磷酸氫二鉀2-4g/L，硫酸鎂0.2-0.5g/L,氯化鉀0.1-0.3g/L，右旋糖酐大分子100010-15g/L，硫酸亞鐵0.005-0.01g/L，甜菜堿消沫劑0.01-0.05g/L，磷酸氫二鈉0.005-0.01g/L，其余為自來水；

(5)發酵培養結束，檢測發酵液的單位酶活，利用蒸汽通過盤管將發酵液加溫到60℃，進行滅活；

(6)經過滅活的發酵液，通過0.5mm孔板過濾器，過濾液進入發酵液儲罐；

(7)發酵液經過0.5mm孔板過濾器過濾后，再通過帶式過濾機；

(8)料液經過帶式過濾機后送入超濾膜循環罐內的物料通過膜的保安過濾器，進入超濾膜，接著清液進入納濾膜儲罐；

(9)在納濾膜儲罐中料液通過膜的保安過濾器進入納濾液儲罐；

(10)在納濾液儲罐中的料液經過0.45um液體過濾器、0.22um液體過濾器兩組除菌過濾器進行除菌過濾，料液進入凍干機的凍干盤；

(11)用螺桿真空冷凍干燥機凍干機進行凍干、升華干燥處理。

凍干機裝入288個300mm×300mm×12mm的凍干盤；每個裝量的厚度為9.5±0.5mm，總裝量在246L；

凍干時的參數設定為：

溫度降至負46℃時開始計算凍干時間，控制負47±1℃維持15-16小時；結束后將溫度升至負30.5±0.5℃，維持150-180min；再次將溫度升高到負20.5±0.5℃，維持120-150min；后將溫度升至負10.5±0.5℃，維持120-150min；再次將溫度升高到負0.5±0.5℃，維持120min；再次將溫度升高到9.5±0.5℃，維持120-150min；再次將溫度升高到負19.5±0.5℃，維持180min；再次將溫度升高到負29.5±0.5℃，維持13-14小時；升華完畢停機出料；

(12)收集的物料進入500L無菌藥品混合機，開機120min進行混合；

(13)用真空包裝機進行包裝，得到右旋糖酐酶凍干粉。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中按2％的體積比接入二代斜面培養后懸浮液，開啟攪拌轉速80轉/min、27℃-29℃條件進行下，培養至38h。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中按2％(體積比)接入種子液400L，開啟攪拌轉速80轉/min、27℃-29℃條件進行下，培養至87h。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述種子培養基的組成如下：

酵母浸粉8g/L,磷酸氫二鉀4g/L，硫酸鎂0.3g/L,氯化鉀0.15g/L，右旋糖酐大分子100012g/L，硫酸亞鐵0.005g/L，甜菜堿消沫劑0.004g/L，磷酸氫二鈉0.005g/L，其余為自來水。