[發(fā)明專利]一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610188229.1
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105779539A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙立娜;劉斌;陳濠;陳紫紅;肖正;林占熺;呂旭聰;李鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/30
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）猴頭菇蛋白提取：利用堿溶酸沉法或用硫酸銨沉降法提取猴頭菇蛋白；所述堿溶酸沉法的具體操作如下：首先將猴頭菇超微粉碎，將粉碎后的猴頭菇與蒸餾水混合，利用NaOH或KOH溶液調(diào)節(jié)pH至9.0-11.0，超聲提取后進(jìn)行水浴提取，提取后過濾，濾液為堿提的猴頭菇蛋白溶液，用鹽酸調(diào)節(jié)堿提的猴頭菇蛋白溶液pH至2.0-4.0進(jìn)行蛋白沉淀，離心得沉淀蛋白，水洗至中性再次離心，將沉淀冷凍干燥即得猴頭菇蛋白；所述硫酸銨沉降法的具體操作如下：首先將猴頭菇超微粉碎，將粉碎后的猴頭菇與蒸餾水混合，逐步加入固體硫酸銨使硫酸銨的飽和度達(dá)40-60wt%，離心得猴頭菇蛋白沉淀，利用透析法脫鹽后冷凍干燥得猴頭菇蛋白；

（2）酶解：將步驟（1）得到的猴頭菇蛋白溶解在水中使蛋白質(zhì)量濃度達(dá)1.0-5.0wt%，調(diào)節(jié)pH至7.0-10.0，溫度保持在40-60℃，加入蛋白酶水解30-120min，滅酶，得到猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物溶液；

（3）多肽-硒螯合物制備：利用固體高溫混合法或者液體螯合法制備猴頭菇蛋白肽-硒螯合物；所述固體高溫混合法的具體操作如下：將步驟（2）得到的猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物溶液冷凍干燥制成猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物凍干粉，并加入亞硒酸鈉粉末混合，300-500℃加熱制備猴頭菇蛋白肽-硒螯合物；所述液體螯合法的具體操作如下：往步驟（2）得到的猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物溶液中加入亞硒酸鈉溶液，攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH為6.0-9.0，在20-80℃條件下持續(xù)反應(yīng)0.5-2.0h，反應(yīng)后冷卻，離心分離去除雜質(zhì)，加入3-5倍體積75-95wt%的乙醇，沉淀靜置12h，離心去除上清液，獲得猴頭菇蛋白肽-硒螯合物；

（4）將步驟（3）得到的猴頭菇蛋白肽-硒螯合物進(jìn)行冷凍干燥。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法，其特征在于：步驟（1）堿溶酸沉法操作中猴頭菇與蒸餾水以w/v為1:20-80的比例混合；硫酸銨沉降法操作中猴頭菇與蒸餾水以w/v為1:20-60的比例混合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法，其特征在于：步驟（1）堿溶酸沉法操作中NaOH和KOH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1wt%~5wt%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法，其特征在于：步驟（1）堿溶酸沉法操作中超聲提取時(shí)間為20-60min，超聲功率為100-200W；水浴提取時(shí)間為60-90min，溫度50-100℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法，其特征在于：步驟（1）中離心沉淀處理的條件為：離心速率為4000-5000r/min，離心時(shí)間為5-10min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法，其特征在于：步驟（2）中所述蛋白酶為堿性蛋白酶、中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶中的一種，蛋白酶的質(zhì)量濃度為1.0-5.0wt%。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種猴頭菇蛋白肽-硒螯合物的制備方法，其特征在于：步驟（3）固體高溫混合法操作中亞硒酸鈉粉末和猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物凍干粉按照亞硒酸鈉粉末：猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物凍干粉=1:6-5:6的質(zhì)量比混合；液體螯合法操作中亞硒酸鈉溶液和猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物溶液按亞硒酸鈉溶液：猴頭菇蛋白多肽復(fù)合物溶液=1:6-5:6的體積比混合，亞硒酸鈉溶液濃度為0.5-1mol/L。