[發明專利]光度法和XRD聯用確定微量元素復合氨基酸/小肽螯合物合成配比及螯合率快速估測方法

在審

• 申請號: 201610188188.6
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN107286219A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 張前前;劉強;李苓
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07K1/107
• 分類號: C07K1/107;C07C227/18;C07C229/76;G01N21/31;G01N23/20
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1.本發明提供了一種基于光度法和X-射線衍射技術（XRD）結合制備復合氨基酸/小肽微量元素螯合物的方法，其特征在于：利用光度法從合成入手確定復合氨基酸/小肽與微量元素的適宜配比，并利用XRD技術檢測產品中游離的微量元素含量低于5%， 從而確保復合氨基酸/小肽微量元素螯合物中的微量元素以配位形式存在。

2.根據權利要求1所述的苜蓿酶解液復合氨基酸/小肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：5mL苜蓿蛋白酶解液(pH=8.0)加入0.17~ 0.22 mmol氯化銅，調節pH 9.00，溶液均為深藍色，表明有銅螯合物生成，在582nm處有最大吸收峰，當氯化銅的量為0.20 mmol時吸光度最大，氯化銅的量為0.21 mmol時，螯合物的最大吸收峰紅移，說明氯化銅已經過量；因此，初步確定配料比為5mL苜蓿蛋白酶解液:0.20 mmol氯化銅；將上述配比得到深藍色澄清溶液減壓蒸餾，得到濃稠物，用無水乙醇沖洗2次，濾渣在烘箱50℃干燥0.5h，得藍綠色固體粉末；

將該粉末產品進行XRD 分析，XRD譜圖出現的峰為7.5o、24 o、39.5 o、63 o，無原料CuCl₂的峰（2θ為16°、32.5°、34°），表明物料比為5mL苜蓿蛋白酶解液 : 0.20 mmol氯化銅所得的產品中CuCl₂含量低于5%，即產品中微量元素銅(II)以游離形式存在的比例低于5%。

3.根據權利要求1所述的苜蓿酸解液復合氨基酸/小肽微量元素螯合物的制備方法，其特征在于：5mL苜蓿蛋白酸解液(pH=2.0)加入氯化銅的量為0.20~0.25 mmol，調節pH 7.00，溶液為綠色，表明有銅螯合物生成，在615 nm處有最大吸收峰，氯化銅的量為0.24 mmol時，吸光度最大；氯化銅的量為0.25 mmol時，螯合物的最大吸收峰紅移，說明氯化銅已經過量；因此，初步確定配料比為5mL酸解蛋白液 : 0.24 mmol氯化銅；將上述得到綠色澄清溶液減壓蒸餾，得到濃稠物，用無水乙醇沖洗2次，濾渣在烘箱50℃干燥0.5h，得綠色固體粉末；

該粉末產品進行XRD 分析，出現的峰為9.5o、19.5o、39 o、73.5 o，表明是銅螯合物的XRD峰，無CuCl₂的峰，表明CuCl₂含量低于5%。

4.本發明提供了一種利用X-射線衍射技術（XRD）快速估測有機微量元素螯（絡）合物螯（絡）合率的方法，其特征在于：將有機微量元素螯合物產品進行XRD 分析，同時與相應的無機鹽及配體原料的XRD譜圖進行比對，若產品的XRD無相應無機鹽的譜峰，則表明產品中無機鹽含量低于5%，在無其他雜質組分的前提下，可以確定產物螯合率大于95%；例如：利用甘氨酸和硫酸亞鐵為原料合成甘氨酸亞鐵絡合物（見國標GB / T 21996-2008），通過XRD分析，該針狀晶體的XRD譜在2θ為14o、18o、22o、23o、24o、27o、28o、33o、37o、43o、53o處出現峰，比硫酸亞鐵XRD圖譜的峰少，而且二者的出峰位置完全不同，說明產物中不含硫酸亞鐵鹽，嚴格地說硫酸亞鐵鹽含量低于5%，即該產物絡合率大于95%。