[發明專利]山菅蘭的活性提取物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201610187409.8
• 申請日: 2016-03-29
• 公開（公告）號: CN105726410B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 青琳森;王乾龍;楊雪鋒;丁立生
• 申請（專利權）人: 中國科學院成都生物研究所湖州生物資源利用與開發創新中心
• 主分類號: A61K8/9794
• 分類號: A61K8/9794;A61Q19/02
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.一種山菅蘭的活性提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

浸提步驟：將山菅蘭粉末浸泡于pH值為8-10的弱堿水中進行浸提，同時對所述弱堿水進行超聲振蕩，所述超聲振蕩的頻率為20MHz-50MHZ，所述超聲振蕩的時間為30min-50min，然后去除所述山菅蘭粉末得到浸提液，再調節所述浸提液的pH值為2-6，然后靜置處理，再去除所述浸提液的上清液得到沉淀物，將所述沉淀物干燥后得到山菅蘭粗提物；

萃取步驟：將所述山菅蘭粗提物用水溶解得到山菅蘭溶解液，然后向所述山菅蘭溶解液中加入萃取劑進行萃取，所述萃取劑的體積是所述山菅蘭溶解液的體積的0.5-2倍，所述萃取劑包括石油醚、氯仿和乙酸乙酯，在萃取過程中先依次用石油醚和氯仿進行萃取去除所述山菅蘭溶解液中的雜質，再用乙酸乙酯進行萃取，得到乙酸乙酯萃取物；

分離步驟：用硅膠柱色譜法對所述乙酸乙酯萃取物進行分離，用不同配比的有機溶劑混合液作為洗脫劑進行梯度洗脫，得到洗脫液，然后再去除所述洗脫液中的所述洗脫劑，得到所述山菅蘭的活性提取物。

2.根據權利要求1所述的山菅蘭的活性提取物的制備方法，其特征在于，在所述硅膠柱色譜法中，采用干法上樣，色譜柱中裝有的硅膠與所述萃取物的干重之間的重量比為40～50：1。

3.根據權利要求1所述的山菅蘭的活性提取物的制備方法，其特征在于，在所述硅膠柱色譜法中，所述洗脫劑包括：氯仿-丙酮混合液、乙酸乙酯-丙酮混合液、丙酮-甲醇混合液以及甲醇-水混合液，其中所述氯仿-丙酮混合液中氯仿和丙酮的體積比為10～30：1，所述乙酸乙酯-丙酮混合液中乙酸乙酯和丙酮的體積比為20～40：1，所述丙酮-甲醇混合液中丙酮和甲醇的體積比為2～10：1，所述甲醇-水混合液中甲醇和水的體積比為10～20：1。

4.根據權利要求1所述的山菅蘭的活性提取物的制備方法，其特征在于，所述浸提步驟中，所述弱堿水與所述山菅蘭粉末的體積比為6～10：1。

5.一種根據權利要求1-4任一項所述的制備方法制得的山菅蘭的活性提取物。

6.一種根據權利要求5所述的山菅蘭的活性提取物的應用，其特征在于，將所述山菅蘭的活性提取物作為活性成分用于制備抑制B16黑色素瘤細胞分泌黑色素的抑制劑。