[發明專利]一種產細菌素的屎腸球菌及其應用

有效

• 申請號: 201610187192.0
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN105779346B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 武俊瑞;烏日娜;王曉蕊;岳喜慶;陶冬冰
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C07K14/315;A23L3/3526;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽銘揚聯創知識產權代理事務所(普通合伙) 21241
• 代理人: 呂敏

本發明涉及一種產細菌素的屎腸球菌菌株，該菌株的保藏名稱為：屎腸球菌(Enterococcus faecium)R1，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期：2016年1月20日，保藏號：CGMCC No.12085。該菌株來源為農家傳統發酵豆醬，在MRS瓊脂培養基中呈小于1mm的圓形或橢圓形的白色光滑不透明菌落；在MRS液體培養基中呈均勻渾濁生長；電鏡下菌體為球型，成對或鏈狀排列，革蘭氏染色呈陽性。本發明的菌株對抗生素敏感，不含毒力基因，屬于安全菌株。其產生的細菌素為腸球菌素P，在酸性條件下穩定，具有很好的熱穩定性，對常見的腸道致病菌具有良好的抑菌效果。

技術領域

本發明屬于食品生物技術領域，特別是涉及一種產細菌素的屎腸球菌及其應用。

背景技術

近年來食品安全問題頻繁爆發，其主要原因就是致病菌和腐敗微生物的生長繁殖。食品源病原微生物可引起人類疾病，WHO估測全世界每年有成千上萬例食品源疾病，危害人們的健康。為抑制病原微生物的生長繁殖，化學防腐劑的添加成為解決問題的方式之一。然而，化學防腐劑的濫用，使其在飼料及是食品中大量殘留，對禽畜類及人類身體健康產生嚴重威脅。此時生物防腐劑應運而生，乳酸鏈球菌素Nisin是從乳酸菌中提取的天然食品防腐劑，其安全無毒的特點很大程度上避免了化學防腐劑所產生的危害，已經廣泛應用在乳制品、肉制品和飲料等食品保藏中。但最近研究發現，Nisin分子中的“羊毛硫氨酸環”特征結構能夠抑制體內的益生菌，人們開始對此產生懷疑和擔憂。因此，尋找廣譜、高效、穩定和更為安全的天然食品防腐劑是保障食品安全的關鍵和必然趨勢。

傳統發酵豆醬具有豐富的營養價值和乳酸菌資源，其中存在著大量的屎腸球菌(Enterococcus faecium)資源。屎腸球菌作為乳酸菌的一種，具有良好的生物學特性。屎腸球菌是目前農業部令(2013年2045號)動物微生物飼料添加劑欄所允許使用的益生菌種類，研究表明該菌所產生的類細菌素可作為生物防腐劑抑制腐敗菌和致病菌的生長繁殖，屎腸球菌產生的類細菌素具有分子質量小、熱穩定性強等特點，具有良好的應用前景。

發明內容

針對上述存在的技術問題，本發明提供一種產細菌素的屎腸球菌(Enterococcusfaecium)R1及其應用，該菌株對模擬人工消化液有很好的耐受性，該菌株對抗生素敏感，不含毒力基因，屬于安全菌株。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：一種產細菌素的屎腸球菌菌 株，該菌株的保藏名稱為：屎腸球菌(Enterococcus faecium)R1，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址:北京市朝陽區北辰西路1號院，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101，保藏日期：2016年1月20日，保藏號：CGMCC No.12085。

本發明中，所述產細菌素的屎腸球菌菌株，所述屎腸球菌菌株來源于農家傳統發酵豆醬中，在MRS瓊脂培養基中呈小于1mm的圓形或橢圓形的白色光滑不透明菌落；在MRS液體培養基中均勻渾濁生長；電鏡下菌體為球型，成對或鏈狀排列，革蘭氏染色陽性。

本發明中，所述MRS瓊脂培養基為：在MRS液體培養基中加入2％的瓊脂粉；所述MRS液體培養基為：蛋白胨10g，牛肉浸膏8g，酵母粉4g，葡萄糖20g，無水乙酸鈉5g，吐溫1g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸銨2g，七水硫酸鎂0.58g，一水硫酸錳0.25g，蒸餾水1000mL，pH值6.5。

本發明中，所述產細菌素的屎腸球菌的選育方法，使用MRS瓊脂培養基從農家傳統發酵豆醬中篩選分離出乳酸菌菌株，通過平板劃線分離純化出乳酸菌菌株；以常見致病菌為指示菌，應用牛津杯法，篩選出產細菌素的乳酸菌，經16S rDNA測序分析，得到屎腸球菌。

所述產細菌素的屎腸球菌的選育方法，所述從農家傳統發酵豆醬中篩選分離出乳酸菌菌株是采用平板稀釋法，將稀釋后豆醬樣品涂布在MRS固體培養基上，37℃培養24h；挑取疑似乳酸菌形態單菌落于MRS液體培養基中，37℃培養24h。