[發明專利]物種鑒別試劑盒和物種鑒別方法

在審

• 申請號: 201610183690.8
• 申請日: 2016-03-28
• 公開（公告）號: CN105603110A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 顏學恒
• 申請（專利權）人: 上海逍鵬生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海勝康律師事務所 31263
• 代理人: 張堅

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種物種鑒別試劑盒和物種鑒別 方法。

背景技術

細胞培養，最害怕被污染，不僅是要避免細菌,霉菌的污染，也要避免 污染到其他種類的細胞。但是在實驗時，常常需要操作不同種類的細胞， 即使很熟練的操作人員，還是有可能會有細胞混雜的情況。

由于細胞在顯微鏡下的型態，差別不大，因此細胞培養時，如果發生 細胞污染，是沒有辦法可以區別的。以至于一直到實驗結束，都不知道使 用的細胞，已經不是原本的細胞了，也導致實驗結果不被采信，或是做出 錯誤的結論。

因此，如果有一種物種鑒別試劑盒和物種鑒別方法能夠簡單、快速、 靈敏、準確地鑒別出細胞的物種就顯得非常具有意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種能夠簡單、快速、靈敏、準確 地鑒別物種的物種鑒別試劑盒，以克服現有技術存在的不足。

為解決上述技術問題，本發明采用如下的技術方案：

一種物種鑒別試劑盒，其特征在于：包括一個聚合酶鏈式反應試劑、 一個陽性對照品、一個無菌水以及至少一種物種的專一性引物對。

在本發明的物種鑒別試劑盒，有15種物種的專一性引物對，所述15 種物種的專一性引物對分別為兔、馬、雞、狗、綠猴、豬、老鼠、大鼠、 貓、人、恒河猴、牛、倉鼠、果蠅、魚的專一性引物對。

在本發明中，通過下列步驟來確定物種的專一性引物對：

(1)選定待鑒別的物種：依照目前最常見混雜的樣品，選定待鑒別的 物種。

(2)比對基因庫：搜尋基因庫，比對待鑒別物種的異同，選定各物種 專一的檢測基因序列作為引物。

(3)設計引物：選定檢測基因序列作為引物，設計聚合酶鏈式反應所 用引物，需考慮專一性、靈敏度，以及各種反應條件。

(4)以細胞株模擬物種進行專一性測試：引物設計完成后，以細胞株 進行模擬測試專一性，如專一性不足，則重新設計引物。

(5)以陽性對照質粒驗證靈敏度：引物專一性達標后，以陽性對照質 粒來檢測引物靈敏度，目標100顆細胞即可檢測，如果靈敏度不足，則重 新設計引物。

(6)以細胞株模擬物種進行專一性測試：引物專一性與靈敏度皆達標 后，以細胞株相互混合，模擬物種混雜，測試引物的鑒別效能。

另外，本發明還提供一種物種鑒別方法，該鑒別方法采用上述物種鑒 別試劑盒，其步驟為：

(1)將待測細胞與各個物種的專一性引物對進行PCR反應；

(2)將PCR反應產物進行跑膠，獲得PCR反應產物大小；

(3)根據PCR反應產物大小鑒別出待測細胞物種。

采用上述技術方案，本發明相比現有技術具有簡單、快速、靈敏、準確 地鑒別細胞物種的優點，具體體現在：

(1)操作簡便:只要使用本專利提供的試劑盒，就可以鑒別細胞的物 種。

(2)判讀容易:每個物種的聚合酶鏈式反應產物大小固定，訊號清晰， 容易判讀。

(3)專一性強:單一物種只會有專一的訊號，不會與其他物種混淆。

(4)靈敏度高:100顆細胞就可以正確鑒別物種。

(5)用途廣泛：不僅能夠鑒別出單一物種的細胞物種；而且可以鑒別 物種混雜的細胞物種。

附圖說明

下面結合附圖和具體實施方式對本發明進行詳細說明：

圖1A、圖1B為兔的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑膠 結果圖；

圖2為馬的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑膠結果圖；

圖3A、圖3B為雞的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑膠 結果圖；

圖4為狗的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑膠結果圖；

圖5為綠猴的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑膠結果圖；

圖6為豬的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑膠結果圖；

圖7A、圖7B為老鼠的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑 膠結果圖；

圖8A、圖8B為大鼠的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑 膠結果圖；

圖9為貓的專一性引物與15個物種進行PCR反應后的跑膠結果圖；