[發明專利]小鼠短串聯重復序列的復合擴增體系及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201610177489.9
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN105648100B
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 孟淑芳;樊金萍;徐苗;吳雪伶;呂悅心;陳初光;趙翔;馮建平
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院;北京閱微基因技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

本發明涉及小鼠短串聯重復序列的復合擴增體系及檢測試劑盒，屬于生物檢測技術領域。本發明選擇了9個具有高度靈敏性及擴增特異性的小鼠STR位點，一次性擴增，其擴增的位點是一些可以用來鑒定小鼠細胞系的STR位點，在鑒定小鼠細胞系時，具有快速、操作簡單、結果準確、便于大規模推廣等優點，這種方法隨著試劑盒開發成功可以批量生產，使用條件可以模式化，全部過程都有自動化設備，不再依賴于人的操作經驗，可以實現自動化，所需時間短，整個檢測時間需要6小時左右。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及鑒定小鼠多個短串聯重復序列的復合擴增體系及其試劑盒，可以快速準確進行小鼠細胞STR分型進而鑒定小鼠細胞系類型。

背景技術

2009年，Nature上的一篇社論指出：在數以千計的使用細胞系的生物實驗室中，許多實驗室并不知道，介于1/5-1/3之間的常用細胞系可能已不是原先認為的那樣了。過去的25年里，大量的研究，加上美國、英國、德國和日本細胞庫的經驗發現：18-36％的培養物含有錯誤鑒定的物種或其它細胞類型。

2010年5月ATCC SDO(Standards Development Organization)工作組在Naturereview cancer雜志上發表了題為《Cell line misidentification：the beginning ofthe end》前瞻性報道。報道指出：細胞系作為正常或腫瘤組織的模式細胞被廣泛應用于科學研究和藥物開發，然而很大一部分的細胞系被錯誤標記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代，由于科學界無法解決此類問題以致大量因使用錯誤鑒定的細胞系而導致誤導或存在潛在錯誤的學術論文發表。

目前許多方法已被用來檢測細胞系交叉污染，包括同工酶分析、核型分析、人類白細胞抗原(HLA)分型，免疫分型和DNA指紋識別。這些方法都可以鑒別出某一種細胞系，但是鑒別細胞交叉污染的能力各不相同。而且，這些方法在不同實驗室所得到的數據卻不盡相同，以致沒有任何一種方法可以用來建立一個標準參考數據庫。

STR位點是生物物種基因組上存在的由不同數目重復單元組成的重復DNA序列，具有高度多態性，是一種良好的物種內或物種間鑒別的標記。通過一個PCR反應，可同時擴增出多個長短不一的STR片段，通過引物上標記的不同熒光基團，對不同的STR組別加以區分，可形成具有個體特征的圖譜，進而可以對細胞進行鑒別。STR檢測最先應用于親緣鑒定、法醫鑒定、以及鑒定在20年之前的大災難中遇難的受害者。隨后，STR分型用于細胞鑒定中。目前，STR分型技術已被廣泛應用于人源細胞系的鑒定，并已建立起標準的STR Marker組合，用于鑒定1000多種細胞。

在過去一個世紀的研究中，小鼠已經成為建立人類遺傳性疾病的動物模型的最佳實驗材料，小鼠細胞系已廣泛應用于生命科學研究的各個領域。如3T3、小鼠骨髓瘤細胞、L-929、和CTLL-2等多種，是除了人類細胞外被應用數量最多的動物細胞，數量有幾百種。因此，建立小鼠細胞系的STR分型方法，對于每一位使用小鼠細胞系的研究者來說無疑是一個福音，也必將極大地促進人類健康事業的發展。

在2011年，專利CN102559878B，率先建立了小鼠短串聯重復序列的復合擴增體系及檢測試劑盒，包含7個STR位點和1個性別判定位點，打開STR小鼠細胞分型檢測的新篇章。但該專利采用的STR位點均為2nt.重復，導致stutter峰高，不利于判斷小鼠細胞間交叉污染；并且僅有小鼠STR位點，無法對人、鼠細胞交叉污染做出判斷。

發明內容

針對上述領域中的不足和需求，本發明提供一種鑒定小鼠細胞系的復合擴增體系，其擴增的位點是一些可以用來鑒定小鼠細胞系的STR位點，在鑒定小鼠細胞系時，具有快速、操作簡單、結果準確、便于大規模推廣等優點，這種方法隨著試劑盒開發成功可以批量生產，使用條件可以模式化，全部過程都有自動化設備，不再依賴于人的操作經驗，可以實現自動化，所需時間短，整個檢測時間需要6小時左右。