[發(fā)明專利]棒束孢微菌核的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610177488.4
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN105695344B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋章永;王中康;殷幼平
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P7/04;C12R1/645
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務(wù)所(普通合伙) 50211
• 代理人: 郭云

本發(fā)明公開了一種棒束孢微菌核的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，發(fā)酵方法包括：1)制備棒束孢孢子接種體；2)微菌核誘導培養(yǎng)：將步驟1中制備的棒束孢孢子接種體加入誘導培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)6～8天；3)發(fā)酵液過濾，棄去上清液，得到微菌核沉淀，干燥，保存。還公開了棒束孢微菌核在防治粉虱類害蟲中的應(yīng)用以及一種防治粉虱類害蟲的生防制劑。本發(fā)明方法生產(chǎn)的微菌核能夠適應(yīng)高溫、干旱、強紫外等外界不良環(huán)境，具有抗逆耐儲、貨架期長和持續(xù)控害的特點；微菌核發(fā)酵周期短，生產(chǎn)成本低、工藝可控性強，所用原料易于獲取。微菌核可以用作制備新型殺蟲真菌制劑的活性成分。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制劑領(lǐng)域，具體涉及棒束孢微菌核的培養(yǎng)方法及其在防治害蟲方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

粉虱類刺吸式口器的害蟲常群集于葉片、嫩莖、花蕾、頂芽等部位，刺吸汁液，使葉片皺縮、卷曲、畸形，嚴重時引起枝葉枯萎甚至整株死亡，危害于多種農(nóng)作物、果木、蔬菜等。目前刺吸式口器害蟲防控主要依靠化學防治，化學農(nóng)藥的大量施用導致害蟲抗藥性產(chǎn)生，并且污染生態(tài)環(huán)境、影響蔬菜農(nóng)產(chǎn)品安全、威脅人民身體健康；還大量殺傷害蟲天敵，破壞生態(tài)平衡。

棒束孢(Isaria)是一類能夠寄生于多種害蟲的蟲生真菌，能穿透害蟲體表進入體內(nèi)，在害蟲體內(nèi)繁殖消耗寄主營養(yǎng)使害蟲致死，能造成害蟲局域內(nèi)的流行性病發(fā)生；同時具有不污染環(huán)境、無殘留、對人畜無害、害蟲不會產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點，已經(jīng)越來越廣泛地應(yīng)用到害蟲的生物防治。由于液體發(fā)酵產(chǎn)生的芽生孢子有不耐儲存，致病力低等缺陷，不適宜作為殺蟲制劑的有效成分。目前利用棒束孢進行生物防治的有效成分為分生孢子，是通過液固兩相發(fā)酵工藝進行生產(chǎn)的，但棒束孢產(chǎn)孢需要光照刺激，生產(chǎn)周期長、并且分生孢子抗逆能力差、貨架期短，導致生產(chǎn)成本偏高，田間防效不穩(wěn)，影響了棒束孢的產(chǎn)業(yè)化與實際應(yīng)用。

寄生真菌主要類群為絲狀真菌，通常產(chǎn)生菌絲體和分生孢子，少數(shù)種類也可產(chǎn)生厚垣孢子。真菌微菌核是絲狀真菌度過高溫、低溫或干旱等不良環(huán)境的休眠繁殖體，是菌絲體互相糾結(jié)，菌絲變異分化產(chǎn)生的外層致密堅硬、有色素沉淀，內(nèi)層髓質(zhì)化的組織體，能夠在一定的濕度和溫度條件下，重新萌發(fā)進行產(chǎn)孢。目前已證實蟲生真菌液體誘導產(chǎn)生的微菌核能夠作為一種分生孢子的替代有效成分，應(yīng)用于生物防治。目前寄生真菌的菌核或微菌核的誘導形成僅在白僵菌、綠僵菌和野村菌有報導，而棒束孢微菌核誘導形成未見報導。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對上述問題，提供一種可規(guī)模化生產(chǎn)棒束孢微菌核的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，開發(fā)生產(chǎn)成本低、侵染活力高、抗逆性強的棒束孢新侵染結(jié)構(gòu)體，提供一種防治害蟲的生防制劑，為殺蟲真菌制劑的創(chuàng)制提供高質(zhì)量的母藥或原粉，解決目前沒有有效的棒束孢微菌核的培養(yǎng)方法，和傳統(tǒng)孢子菌劑抗逆能力差、貨架期短，貯運不便的共性技術(shù)難題。

本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的：

一種棒束孢微菌核的培養(yǎng)方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)制備棒束孢孢子接種體；

2)微菌核誘導培養(yǎng)：將步驟1中制備的棒束孢孢子接種體加入誘導培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)6～8天；

所述誘導培養(yǎng)液中含有的原料及其含量如下：