[發明專利]一種檢測基因工程酶活力的方法有效
| 申請號： | 201610176972.5 | 申請日： | 2016-03-25 |
| 公開（公告）號： | CN105755104A | 公開（公告）日： | 2016-07-13 |
| 發明（設計）人： | 王倩;周林;周翠蘭;徐惠芬;張安迪;張佳;李凱 | 申請（專利權）人： | 蘇州佳章生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/44 | 分類號： | C12Q1/44;C12Q1/06;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103 | 代理人： | 范晴 |
| 地址： | 215163 江蘇省蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 基因工程 活力 方法 | ||
1.一種檢測基因工程酶活力的方法，其特征在于，其包括如下步驟：
(1)選取含有攜帶lacZ基因的載體，
(2)構建含有雙重復片段的載體：將兩個重復片段插入到所述的載體中，且將待測核酸酶的靶序列插入兩個重復片段之間，所述的兩個重復片段的序列完全一致，且所述的兩個重復片段為移動報告基因的閱讀框架；
(3)將步驟(2)構建的含有基因工程核酸酶與雙重復片段的載體進行在含有X-Gal-IPTG的培養基中進行轉化，
(4)根據共轉化的菌落形成結果對酶活力進行評價。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述載體選自PMD19-T、PMD18-T、CRISPR/Cas9。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述重復片段的長度為10到50個堿基。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述重復片段包括EGFR重復片段，其核苷酸序列如SeqIDNo.1所示；HBV重復片段，其核苷酸序列如SeqIDNo.2所示；LoxP重復片段，其核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
5.根據權利要求1-4任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述待測核酸酶為血管緊張素原AGT基因。
6.根據權利要求1-4任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述待測核酸酶的靶序列片段如SeqIDNo.4或5所示。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(4)中菌落形成結果包括：菌落顏色的藍色與白色的差異、菌落有無的差異、菌落多少的差異。
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