[發(fā)明專利]一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610174130.6
• 申請(qǐng)日: 2016-03-24
• 公開（公告）號(hào): CN105647821B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 龍良鯤;丁少軍;丁達(dá)繁;徐梅娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/15
• 分類號(hào): C12N1/15;C12N15/80;C12N9/42;C12R1/885
• 代理公司: 南京申云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發(fā)明公開了一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。瑞氏木霉工程菌CstrxR1，分類名稱為瑞氏木霉Trichoderma reesei CstrxR1，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為：2016年3月1日，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2016078，保藏地址為中國(guó)湖北武漢武漢大學(xué)。本發(fā)明的瑞氏木霉工程菌CstrxR1，其各纖維素酶產(chǎn)量與瑞氏木霉親本菌株相比提高0.78倍。本發(fā)明對(duì)提高纖維素酶生產(chǎn)效率具有重要應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于工程菌技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

纖維素酶是能將纖維素降解為葡萄糖單體的一組酶系的總稱，通常包括內(nèi)切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。纖維素酶資源對(duì)于可持續(xù)利用生物質(zhì)資源具有重要意義，可廣泛應(yīng)用于生物能源、飼料、洗滌、造紙及植物源活性物質(zhì)制備等領(lǐng)域。瑞氏木霉（Trichoderma reesei）能夠產(chǎn)生完整的纖維素酶系，是工業(yè)生產(chǎn)纖維素酶的重要菌株。當(dāng)前，傳統(tǒng)的誘變育種技術(shù)難以繼續(xù)提升瑞氏木霉產(chǎn)纖維素酶的能力。借助基因工程手段改良瑞氏木霉的纖維素酶產(chǎn)生能力，成為降低纖維素酶生產(chǎn)成本的有效途徑。

絲狀真菌的細(xì)胞氧化還原狀態(tài)能夠控制許多重要基因的表達(dá)調(diào)控。硫氧還蛋白系統(tǒng)（thioredoxin system）是存在于絕大多數(shù)生物體中的一類抗氧化系統(tǒng)，具有調(diào)控細(xì)胞氧化還原平衡等多種重要功能。硫氧還蛋白從氧化態(tài)轉(zhuǎn)化成還原態(tài)依賴于硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase，TrxR） 的催化作用。因而，TrxR對(duì)于胞內(nèi)的氧化還原平衡或某些蛋白分子的氧化還原狀態(tài)具有重要的調(diào)控作用。瑞氏木霉細(xì)胞中具有高水平的 TrxR會(huì)極大的改變其細(xì)胞氧化還原狀態(tài)，進(jìn)而增強(qiáng)相關(guān)蛋白（如纖維素酶）分子的基因表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1，能高產(chǎn)纖維素酶。本發(fā)明的另一目的是提供上述瑞氏木霉工程菌CstrxR1的構(gòu)建方法。

技術(shù)方案，為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1，分類名稱為瑞氏木霉Trichoderma reesei CstrxR1，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為：2016年3月1日，保藏編號(hào)為CCTCCNO：M2016078，保藏地址為：中國(guó)湖北武漢武漢大學(xué)。

在所述的瑞氏木霉工程菌CstrxR1中克隆有來(lái)自于蟲擬蠟菌的硫氧還蛋白還原酶基因序列，該基因序列如SEQ ID NO.1所示。

構(gòu)建所述瑞氏木霉工程菌CstrxR1的方法：將序列如SEQ ID NO.1所示的DNA片段通過質(zhì)粒pAg1-CstrxR1導(dǎo)入瑞氏木霉基因組，所述質(zhì)粒pAg1-CstrxR1是在質(zhì)粒pAg1-H3的KpnI和ApaI位點(diǎn)順序裝入瑞氏木霉纖維二糖水解酶I啟動(dòng)子序列Pcbh1、序列如SEQ IDNO.1所示的DNA片段和瑞氏木霉纖維二糖水解酶I 終止序列Tcbh1。

所述瑞氏木霉為瑞氏木霉D-86271。

所述的瑞氏木霉工程菌CstrxR1在產(chǎn)纖維素酶中的應(yīng)用。

有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明成功構(gòu)建出瑞氏木霉工程菌CstrxR1，通過實(shí)驗(yàn)證明高表達(dá)蟲擬蠟菌中硫氧還蛋白還原酶編碼基因的瑞氏木霉工程菌，其纖維素酶產(chǎn)量（濾紙酶活）與親本瑞氏木霉相比提高0.78倍。本發(fā)明對(duì)工業(yè)生產(chǎn)中提高纖維素酶生產(chǎn)效率具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

附圖說(shuō)明

圖1是表達(dá)質(zhì)粒pAg1-CstrxR1的圖；