[發明專利]一種半乳糖化殼聚糖修飾的免疫醇質體的制備方法

有效

• 申請號: 201610172651.8
• 申請日: 2016-03-24
• 公開（公告）號: CN105726485B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發明（設計）人: 王紅聲;楊興興;林思;余凡;馬琳琳;駱格杰;潘瀟涵
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/28;A61K47/24;A61K47/18;A61K47/36;A61K39/00
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

本發明涉及一種半乳糖化殼聚糖修飾的免疫醇質體的制備方法，將卵磷脂、膽固醇、十八胺混合后溶于乙醇中，旋轉蒸發，得到脂質體膜，然后加入抗原蛋白溶液，超聲分散，得到負載抗原蛋白的免疫醇質體；利用層層自助裝技術，將負載抗原蛋白的免疫醇質體滴加到透明質酸(HA)溶液中，攪拌，得到混合溶液，然后滴加到半乳糖化的殼聚糖(GC)溶液中，攪拌，即得。本發明制備的(GC)修飾的免疫醇質體具有高變形性、高包封率、能夠軟化角質并完整地滲透皮膚(從而免疫機體使之獲得相應抗性)、對皮膚無刺激，性質穩定以及制備方法簡單等優點，是構建經皮免疫貼劑的理想載體。

技術領域

本發明屬于免疫醇質體的制備領域，特別涉及一種半乳糖化殼聚糖修飾的免疫醇質體的制備方法。

背景技術

經皮免疫(Transcutaneous immunization，TCI)是近年發展起來的一種新型免疫接種策略，它是將抗原和佐劑局部應用于皮膚而誘導產生全身免疫反應的新方法，可以克服目前注射接種方式存在順應性差、免疫效率低、易產生耐受等的缺陷，有著廣闊的應用前景。目前限制其應用的主要障礙是皮膚表層角質層的屏障作用，使疫苗的大分子抗原物質難以通過皮膚表層而進入富含抗原提呈細胞(Antigen-presenting cells，APCs)的活性表皮層和真皮層，因此在不犧牲皮膚完整性的條件下研究一種新型的經皮免疫系統是開發經皮免疫的關鍵所在。

醇質體(ethosomes)不僅具有低毒性、低免疫性、良好的細胞相容性、可同時裝載水溶性、脂溶性和大分子藥物等優點，因而在藥物遞送尤其是透皮給藥領域受到廣泛關注。溶解在醇質體磷脂層中的高濃度的醇可增強膜的柔性性和流動性,使其在傳遞過程中可以變形，因此可以通過比其本身更小的間隙，透過紊亂的角質層。另外，醇質體可與細胞膜發生融合,透過細胞膜將藥物直接釋放到細胞內發揮作用。以醇質體作為經皮免疫載體，可有效的將抗原遞送至皮膚的抗原呈遞細胞引發免疫應答反應。

在皮膚的活性表皮層存在著樹突狀細胞-朗格漢斯細胞(未成熟的樹突狀細胞)，樹突狀細胞表面有甘露糖受體，該受體可以識別半乳糖基上的環結構，因此，在載有抗原的醇質體表面修飾半乳糖化的殼聚糖((GC))可以增加該系統的靶向性，從而增強免疫效應。透明質酸((HA))和所制得的(GC)都具有良好的生物相容性且帶有相反電荷，利用層層自組裝技術可以將其靜電吸附于醇質體表面，所得的(GC)修飾的免疫醇質體不僅有良好的透皮效率還可以主動靶向樹突狀細胞從而引發免疫應答，使機體獲得特定抗性。

綜上所訴，基于醇質體制備技術和層層自組裝技術可制得一種半乳糖化殼聚糖修飾的免疫醇質體，能夠有效經皮遞送抗原，使機體獲得相應免疫能力。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種半乳糖化殼聚糖修飾的免疫醇質體的制備方法，本發明操作簡便，制備時間短且條件溫和，利于大批量生產；所得到的免疫醇質體不僅有良好的透皮效率還可主動靶向樹突狀細胞有效引發免疫反應，方便應用于免疫接種領域。

本發明的一種半乳糖化殼聚糖修飾的免疫醇質體的制備方法，包括：

(1)將卵磷脂、膽固醇、十八胺混合后溶于乙醇中，旋轉蒸發，得到脂質體膜，然后加入抗原蛋白溶液，超聲分散，得到負載抗原蛋白的免疫醇質體；

(2)利用層層自組裝技術，將負載抗原蛋白的免疫醇質體滴加到透明質酸(HA)溶液中，攪拌，得到混合溶液，然后滴加到半乳糖化的殼聚糖(GC)溶液中，攪拌，即得半乳糖化殼聚糖修飾的免疫醇質體。

步驟(1)中加入十八胺的目的是使醇質體帶正電。

醇質體的制備方法為薄膜分散法。

所述步驟(1)中卵磷脂、膽固醇、十八胺的質量比為25:2.5:1。

所述步驟(1)中抗原蛋白溶液的溶劑為乙醇水溶液，其中乙醇:水的體積比為1:9-3:7。