[發明專利]一種流感病毒分離無血清培養基及其用途和制備

有效

• 申請號: 201610171883.1
• 申請日: 2016-03-24
• 公開（公告）號: CN105779376B
• 公開（公告）日: 2019-08-30
• 發明（設計）人: 曲寶赤
• 申請（專利權）人: 友康恒業生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京市振邦律師事務所 11389
• 代理人: 李朝輝

1.一種流感病毒分離無血清培養基，其特征在于包括如下成分：

甘氨酸、L-精氨酸鹽酸鹽、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸鹽酸鹽、 L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、L-組氨酸鹽酸鹽、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L- 賴氨酸鹽酸鹽、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇 氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸、生物素、氯化膽堿、D-泛酸鈣、 葉酸、煙酰胺、對氨基苯甲酸、鹽酸吡哆醇、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫 胺素鹽酸鹽、維生素B12、肌醇、4水硝酸鈣、7水硫酸鎂、氯化鉀、 碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸氫二鈉、葡萄糖、還原型谷胱甘肽、HEPES、 酚紅鈉鹽。

2.如權利要求1所述的培養基，其特征在于還包括如下成分：

5水硫酸銅、9水硝酸鐵、7水硫酸亞鐵、無水氯化鎂、7水硫酸鋅、1 水磷酸二氫鈉、丙酮酸鈉、腐胺鹽酸鹽、白蛋白。

3.如權利要求1所述的培養基，其特征在于各成分含量如下,所述含量 單位為mg/L：

甘氨酸0.1-300、L-精氨酸鹽酸鹽0.1-500、L-天冬酰胺0.05-200、L- 天冬氨酸0.05-200、L-胱氨酸鹽酸鹽0.1-200、L-谷氨酰胺0.1-500、L- 谷氨酸0.01-200、L-組氨酸鹽酸鹽0.1-300、L-異亮氨酸0.5-150、L- 亮氨酸0.5-150、L-賴氨酸鹽酸鹽1-350、L-甲硫氨酸0.1-150、L-苯丙 氨酸0.5-300、L-脯氨酸0.01-100、L-絲氨酸0.01-150、L-蘇氨酸 0.1-200、L-色氨酸0.01-50、L-酪氨酸0.05-150、L-纈氨酸0.05-150、 生物素0.001-0.01、氯化膽堿0.01-50、D-泛酸鈣0.005-20、葉酸 0.005-30、煙酰胺0.005-30、對氨基苯甲酸0.001-50、鹽酸吡哆醇 0.005-50、鹽酸吡哆醛0.005-50、核黃素0.001-10、硫胺素鹽酸鹽 0.01-100、維生素B120.01-75、肌醇0.1-150、4水硝酸鈣0.1-200、7 水硫酸鎂0.1-150、氯化鉀0.5-500、碳酸氫鈉1-6000、氯化鈉 10-10000、磷酸氫二鈉1-500、葡萄糖1-5000、還原型谷胱甘肽 0.001-300、HEPES100-8000、酚紅鈉鹽0.1-200。

4.如權利要求1-3之一所述的培養基，其特征在于各成分含量為,所述 含量單位為mg/L：

5水硫酸銅0.001-0.01、9水硝酸鐵0.01-0.1、7水硫酸亞鐵0.05-100、 氯化鎂0.1-100、7水硫酸鋅0.01-100、磷1水酸二氫鈉0.1-200、丙酮 酸鈉0.1-300、腐胺鹽酸鹽0.001-0.01、白蛋白1-5000。

5.如權利要求1-4之一所述的培養基，其PH值為7.0-7.6。

6.一種維持MDCK細胞生長，分離流感病毒的方法，其特征在于使用 如權利要求1-4之一所述的培養基培養MDCK。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于病毒復制所使用的細胞為 MDCK細胞或Vero細胞，所述流感病毒為甲型、乙型或丙型流感。

8.一種流感病毒分離無血清培養基的檢測方法，其特征在于從如下幾 個方面檢測1-4之一的細胞培養基：滲透壓、內毒素指標、無菌性、支 原體檢測。

9.一種流感病毒培養基的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

1)將權利要求1-4之一所述的培養基，用蒸餾水溶解，

2)調節PH值，

3)用工業濾芯過濾，

4)在氮氣保護下分裝。