[發明專利]一種豬Oct4基因插入/缺失的檢測方法及其應用

有效

• 申請號: 201610171698.2
• 申請日: 2016-03-23
• 公開（公告）號: CN105779594B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 潘傳英;任發;于帥;陳瑞;曾文先;呂曉燕;陶明亮
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

1.一種豬Oct4基因插入/缺失的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：以待測大白豬公豬全基因組DNA為模板，以引物對P1為引物，通過PCR擴增豬Oct4基因片段，該片段包含豬Oct4基因12-bp插入/缺失多態性位點，所述12-bp插入/缺失多態性位點為大白豬公豬睪丸繁殖性狀的DNA標記；對PCR擴增得到的片段進行瓊脂糖凝膠電泳；根據瓊脂糖凝膠電泳結果確定待測公豬在所述12-bp插入/缺失多態性位點的多態性；所述12-bp插入/缺失多態性位點的多態性為：插入/插入基因型表現為一條344bp帶紋，缺失/缺失基因型表現一條332bp帶紋，插入/缺失基因型表現為344bp和332bp兩條帶紋；

所述引物對P1為：

上游引物：5’-CTTCCACTTGGCTACTTCTTT-3’；

下游引物：5’-GCTGTGGCATAGGTTTGAT-3’。

2.根據權利要求1所述一種豬Oct4基因插入/缺失的檢測方法，其特征在于：所述PCR的擴增反應程序為：

1)95.0℃預變性3min，然后進入步驟2)；

2)95.0℃變性30s，60℃復性60s，72.0℃延伸40s，共35個循環；

3)經過步驟2)后，72.0℃延伸10min。

3.根據權利要求1所述一種豬Oct4基因插入/缺失的檢測方法，其特征在于：所述瓊脂糖凝膠電泳采用的瓊脂糖凝膠的質量濃度為3.5％。

4.一種豬Oct4基因插入/缺失的檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括用于PCR擴增豬Oct4基因中12-bp插入/缺失多態性位點的引物對P1，所述12-bp插入/缺失多態性位點為大白豬公豬睪丸繁殖性狀的DNA標記，所述引物對P1為：

上游引物：5’-CTTCCACTTGGCTACTTCTTT-3’；

下游引物：5’-GCTGTGGCATAGGTTTGAT-3’；

所述12-bp插入/缺失多態性位點的多態性為：插入/插入基因型表現為一條344bp帶紋，缺失/缺失基因型表現一條332bp帶紋，插入/缺失基因型表現為344bp和332bp兩條帶紋。

5.一種如權利要求1所述豬Oct4基因插入/缺失的檢測方法在公豬分子標記輔助選擇育種中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述公豬睪丸繁殖性狀為睪丸重、睪丸長周長或睪丸短周長指數。