[發明專利]一種全人源抗TNF-α單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201610171500.0
• 申請日: 2016-03-23
• 公開（公告）號: CN105777905B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 涂晶晶;李揚;楊彬;李文佳;孫文正
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/395;A61P19/02;A61P29/00;A61P17/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及生物技術領域，具體的涉及一種全人源抗TNF?α單克隆抗體，重鏈可變區具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列或與其具有至少98％的同源性的氨基酸序列，輕鏈可變區具有SEQ IDNO：2所示氨基酸序列或與其具有至少98％的同源性的氨基酸序列。另外本發明也公開了一種上述新型全人源抗TNF?α單克隆抗體的DNA序列，重鏈可變區核苷酸編碼為SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，輕鏈可變區核苷酸編碼為SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。本發明公開了人源抗TNF?α單克隆抗體在制備治療自身免疫性疾病藥物中的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體的公開了一種新型全人源單克隆抗體，包括編碼序列、表達載體、宿主細胞及其制備方法和所述抗TNF-α人源抗體在制備治療自身免疫性疾病藥物中的應用。

背景技術

腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factorα，TNF-α)是一類具有廣泛生物學活性的細胞因子，主要由單核細胞、巨噬細胞、脂肪細胞、B細胞、T細胞和自然殺傷(NK)細胞等免疫細胞產生。體內TNF-α蛋白有跨膜型TNF-α和分泌型TNF-α。跨膜TNF-α全長233個氨基酸，其中1-76位氨基酸是信號肽(包括跨膜氨基酸)，77-233氨基酸是胞外段。第77-233個氨基酸也是分泌型TNF-α的氨基酸序列，其大小為17KD(Smith，et al.，J.Biol.Chem.262：6951-6954，1987)，以三聚體形式與細胞表面的TNF受體(TNFR)結合，介導多種生物學效應。TNF-α作用于瘤細胞表面的受體，通過對細胞的識別、結合、內吞進入溶酶體，致溶酶體和蛋白酶類高度活化導致細胞死亡，它在免疫反應、炎癥和損傷反應中起重要作用，主要影響細胞增殖和細胞凋亡的調節，不僅對腫瘤細胞有細胞毒性、細胞溶解、誘導細胞凋亡、抑制增殖等作用，還能夠促進髓樣白血病細胞向巨噬細胞分化，提高中性粒細胞的吞噬能力。

鼠源單抗作為治療藥物存在很多缺陷，由于人體具有強烈的免疫原性，體內消除快，半衰期短，導致臨床療效有限，副作用大。為克服在人體使用鼠抗體產生的問題，對鼠抗體進行遺傳工程改造人源化，例如人鼠嵌合抗TNF-α單抗(Infliximab)是利用基因工程制備獲得的，其可變區仍取自鼠源TNF-α單抗，保留了與腫瘤壞死因子可溶性片段和跨膜區結合的特異性和親和力，恒定區被人IgG1的恒定區所取代，體內半衰期大大延長。然而這些嵌合抗體和人源化抗體仍然可能引起不想要的免疫反應，特別是當長期給藥時。2002年12月Abbott公司的Humira成為第一個獲準用于減輕成人中到重度活動期類風濕性關節炎(RA)的病征和癥狀及抑制關節結構損傷進展的全人單克隆抗體。由于是全人抗體，避免了會產生免疫反應的缺點。

自身免疫性疾病是繼癌癥和心血管疾病的第三大類疾病。RA是最常見的自身免疫病之一，我國類風濕關節炎患病率約為0.32-0.36％，在60歲以上人群發病率高達30％～40％。面對每人每年昂貴進口藥物治療費用，患者往往只能長期忍受痛苦的化學治療。進口抗體藥物雖已進入中國市場，但其昂貴的價格使患者難以接受，因此，迫切需要國產抗體藥物的開發上市。

為試圖克服使用非人源抗體及人源化抗體造成的相關問題，通過構建的全人抗體來降低人抗鼠抗體(HAMA)引發的機體免疫原性，已成為較為有效的治療策略。當前形勢下，在國內，本領域迫切需要建立既能夠保持或提高抗體特異性，又能夠降低或消除抗體免疫原性的抗TNF-α單抗，從而可以用于臨床治療RA和獲得性免疫缺乏綜合癥(AIDS)等。因此，本發明提供了一種安全可靠的，在人體內半衰期更長、功能顯著的人源抗體。

發明內容

本發明公開了一種全人源抗TNF-α單克隆抗體，包括重鏈可變區與輕鏈可變區，其重鏈可變區(VH)具有SEQ ID NO：1氨基酸序列，其輕鏈可變區(VL)具有SEQ ID NO：2氨基酸序列。

本發明公開了一種全人源抗TNF-α單克隆抗體，包括重鏈與輕鏈，其重鏈(H)為SEQID NO：5所示的氨基酸序列，其輕鏈(L)為SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。