[發明專利]一種草坪幣斑病菌的分離方法

有效

• 申請號: 201610170501.3
• 申請日: 2016-03-23
• 公開（公告）號: CN105624049B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 胡健;劉清源;劉芳;孫健;桂維陽
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;邢賢冬

1.一種草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）、病樣采集：切取具有典型幣斑病癥狀的病健交接處植株及土壤樣本作為病樣；

（2）、病樣保濕培養：將步驟（1）獲得的病樣保濕培養2-3天，培養條件為22-25℃光照16h/18-20℃黑暗8 h交替培養；

（3）、病原菌分離：使用接種針挑取經過保濕培養后在病樣表面長出的細絲狀菌絲，置于APDA培養基上，22-25℃黑暗條件培養2-3 d；

（4）、病原菌純化：待氣生菌絲長出后，切取菌落邊緣的菌絲尖端，轉入新的APDA培養基上，22-25℃黑暗條件培養3-5 d，得到目的病原菌。

2.根據權利要求1所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于步驟（1）中，病樣采集工具為土壤取樣器。

3.根據權利要求1所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于步驟（1）中，所述的土壤樣本的直徑為4-5 cm、高度為6-10 cm。

4.根據權利要求1所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于步驟（1）中，所述的病樣裝入信封中，20-30℃溫度下運輸至實驗室，置于4℃冰箱中保存。

5.根據權利要求1所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于步驟（2）中，將病樣置于經過滅菌處理的花盆或穴盤中，噴施無菌水使病樣濕度不低于80%，使用封口膜密封后將病樣置于光照培養箱中進行保濕培養2-3 d，培養條件為22-25℃光照16 h/18-20℃黑暗8h交替培養。

6.根據權利要求 5所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于所述的花盆或穴盤在80 ℃下烘干2 h進行滅菌處理。

7.根據權利要求1所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于步驟（3）中，使用接種針挑取草坪草或土壤表面經過保濕培養后長出的細絲狀菌絲，置于APDA培養基上培養。

8.根據權利要求1所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于所述的APDA培養基的制備方法為：稱取馬鈴薯200 g，削皮切塊后置于去離子水中加熱煮沸20 min，用雙層紗布過濾收集濾液后定容到1 L，加入15 g瓊脂和18 g葡萄糖混勻后，121℃濕熱滅菌20 min，待培養基溫度降至55-60℃，調節培養基的pH為3.8-4.2。

9.根據權利要求1所述的草坪幣斑病菌的分離方法，其特征在于感病植物為草地早熟禾、匍匐剪股穎、海濱雀稗。