[發(fā)明專利]一種用于豬牛口蹄疫疫苗的雙相納米乳佐劑及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610169882.3
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105727284B
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 殷宏;劉學(xué)榮;陳苗苗;安芳蘭;武發(fā)菊;董文教;張榮;武永淑
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所;中農(nóng)威特生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K9/113;A61K47/06;A61K47/44;A61K47/26;A61K47/14;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發(fā)明公開了一種用于豬牛口蹄疫疫苗的雙相納米乳佐劑及其制備方法和用途。本發(fā)明的雙相納米乳佐劑由表面活性劑、助表面活性劑以及油相組成，其中，所述的表面活性劑選自Tween80、油酸聚氧乙烯酯、聚氧乙烯雙油酸酯、Span80中的一種或兩種以上的組合；所述的助表面活性劑選自聚丙醇、PEG 400或二者的組合；所述的油相選自麥芽油、液體石蠟、花生油中的一種或兩種以上的組合。研究表明本發(fā)明的一種新型水包油包水型雙相納米乳佐劑，具有安全性高、副作用小、緩釋能力強等特點。由本發(fā)明的雙相納米乳佐劑制備而成的疫苗，其穩(wěn)定性、免疫效力及安全性均優(yōu)于傳統(tǒng)206佐劑所制備的疫苗。因此，本發(fā)明為提高防控豬牛家畜口蹄疫疫病的水平和效率提供了新的技術(shù)手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疫苗納米乳佐劑及其制備方法和用途，特別涉及一種用于豬牛口蹄疫疫苗的雙相納米乳佐劑及其制備方法和用途，本發(fā)明屬于獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

納米科技是20世紀80年代末期誕生并正在迅速崛起的新興邊緣學(xué)科，由于納米微粒具有小尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)、量子尺寸效應(yīng)和宏觀量子隧道效應(yīng)等特點，能產(chǎn)生許多不同于常規(guī)物態(tài)所具有的新奇特性，顯示出非常廣闊的應(yīng)用前景。因此，應(yīng)用納米技術(shù)和材料開發(fā)靶向、控釋藥物，已經(jīng)成為現(xiàn)代生物制品學(xué)的研究熱點。近年來，納米材料在醫(yī)學(xué)免疫領(lǐng)域，特別在疫苗佐劑方面受到了極大的重視，與傳統(tǒng)油佐劑、氫氧化鋁佐劑相比，納米化佐劑與抗原物質(zhì)結(jié)合具有更大的結(jié)合表面積，可在同等體積下容納更多的抗原，并借助其在水相中的均勻性，可使抗原更不易被降解破壞，提高了接種抗原的利用率。其次，由于納米佐劑的均質(zhì)性優(yōu)于傳統(tǒng)佐劑，可將具有抗原遞呈能力的巨噬細胞、樹突狀細胞等集中在一定區(qū)域，使包裹、吸附或結(jié)合有抗原表位的納米微粒更有效地被抗原遞呈細胞吞噬、加工、遞呈，在短時間內(nèi)激活免疫應(yīng)答，顯著提高機體免疫反應(yīng)的水平。在副作用方面，因納米微粒的利用率極高，使其使用劑量及其副作用顯著降低。更重要的是由于納米佐劑是將抗原包裹于納米粒子內(nèi)部或吸附在其表面，或通過化學(xué)連接作用與納米粒子結(jié)合，從而可持久地釋放被包裹的抗原，其控制釋放效果更為理想。

我國在獸類疫苗生產(chǎn)佐劑使用方面，最常用的是礦物油佐劑蒙特耐得(Montnanide)ISA 206，因為它的如下優(yōu)越性：第一內(nèi)溶成分比較特殊，在與水相的混和乳化中不需再添加其他乳化劑即可與水相結(jié)合成穩(wěn)定的乳劑；第二在油水相混和乳化過程中對硬件設(shè)備要求較低。但隨著疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不斷提高，其缺點不斷突顯，在動物體內(nèi)不能被代謝，毒性較大，注射到動物體內(nèi)會在注射部位局部形成小結(jié)、肉芽腫，有些動物甚至?xí)纬蔁o菌性化膿性炎癥反應(yīng)，而且不能實現(xiàn)隔離、保護、控制釋放、靶向釋放等多種功能的作用，因此本發(fā)明針對上述問題將納米科技和W/O/W技術(shù)相結(jié)合研制獲得一種新型佐劑，主要目的是研究一種穩(wěn)定性良好、安全性高、成本低且易產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的新型納米乳佐劑來替代傳統(tǒng)佐劑，為提高防控豬牛等家畜口蹄疫疾病的水平和效率提供新的技術(shù)手段。

發(fā)明內(nèi)容

面對當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)特別是豬、牛等家畜口蹄疫疫病暴發(fā)和流行以及疫苗免疫持續(xù)期短，過敏反應(yīng)等難以控制的嚴峻形勢，本發(fā)明提出了一種適用于豬牛口蹄疫疫苗的新型水包油包水型(W/O/W)雙相納米乳佐劑，其具有安全性高、疫苗副作用小，抗原緩釋能力強等特點，本發(fā)明的提出為提高防控豬牛等家畜口蹄疫疫病的水平和效率提供了新的技術(shù)手段。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：

1、納米乳佐劑配方的篩選

通過繪制偽三元相圖及正交試驗設(shè)計，篩選出空白納米乳配方。

2、口蹄疫納米乳佐劑疫苗的制備

在15～25℃條件下，按照篩選的空白納米乳配方，用該佐劑與口蹄疫滅活抗原乳化配制疫苗。

3、口蹄疫納米乳佐劑疫苗的質(zhì)量評價

(1)微觀形態(tài)：在透射電鏡下觀察口蹄疫納米乳佐劑疫苗的微觀形態(tài)。

(2)粒徑分布：用激光粒度分析儀測定其平均粒徑及強度粒徑分布。