[發明專利]一種泛三甲基化抗體及其制備方法有效
| 申請號： | 201610166901.7 | 申請日： | 2016-03-23 |
| 公開（公告）號： | CN105713090B | 公開（公告）日： | 2022-04-12 |
| 發明（設計）人： | 藍斐;沈宏杰;徐文綺 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | C07K16/18 | 分類號： | C07K16/18;C07K16/06 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陸飛;盛志范 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 甲基化 抗體 及其 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種泛三甲基化抗體的制備方法，其特征在于具體步驟為：
直接用免疫抗原偶聯載體蛋白，包括牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白或牛甲狀腺球蛋白，作為免疫抗原前提底物，用烷基化試劑(2-溴乙基)-三甲基溴化銨通過化學修飾把載體蛋白中的半胱氨酸進行烷基化修飾模擬成三甲基化修飾賴氨酸，記為Kc[me3]；
再以這個富含模擬的三甲基化修飾賴氨酸的載體蛋白Kc[me3]作為免疫抗原，免疫兔子，得到特異識別三甲基化蛋白的血清抗體。
2.根據權利要求1所述的泛三甲基化抗體的制備方法，其特征在于具體操作流程如下：
（1）取10-50mg載體蛋白溶解到烷基化試劑中，烷基化試劑的主要成分為:4-羥乙基哌嗪乙磺酸、 鹽酸胍、L-甲硫氨酸；
（2）加入1-10mg二硫蘇糖醇，進行反應；
（3）加入10倍載體蛋白量的(2-溴乙基)-三甲基溴化銨，進行烷基化反應；
（4）補加1-10mg二硫蘇糖醇，繼續避光烷基化反應；
（5）加入20-100ul 14.2M巰基乙醇終止反應，得到模擬三甲基化修飾的載體蛋白Kc[me3]；
（6）取0.1-1mg載體蛋白Kc[me3]免疫兔子，得到血清抗體，即泛三甲基化抗體。
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