[發(fā)明專利]石蠟包埋組織樣本中交聯(lián)DNA的快速分離與檢測(cè)的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610165727.4
• 申請(qǐng)日: 2016-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN105779438A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃家強(qiáng);景坤玉;林舒曄;林博楠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京交通大學(xué);黃家強(qiáng)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎;趙曉丹

1.一種石蠟包埋組織樣本中交聯(lián)DNA的快速分離與檢測(cè)的方法，其特 征在于，該方法包括如下步驟：

置石蠟包埋組織樣本于樣品管中，加水，60-80℃孵育，移棄上清；

加入蛋白質(zhì)降解試劑，孵育；

添加DNA解交聯(lián)與分離提取試劑，震蕩，所述DNA解交聯(lián)與分離提取 試劑為Chelex100；

高溫震動(dòng)孵化；離心留取上清；

上清中加入加樣承載緩沖液；

電泳檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法進(jìn)一步包括將上 清轉(zhuǎn)入新的樣品管中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法進(jìn)一步包括在所 述上清中加入RNaseA。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述60-80℃孵育時(shí)間為 5-10min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白質(zhì)降解試劑選自 蛋白酶K、胰蛋白酶(Trypsin)和或組織蛋白酶(cathepsin)中的一種或多 種，優(yōu)選地為蛋白酶K。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述Chelex100的濃度為 2-50％(g/mL)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述高溫震動(dòng)孵化條件 為80-100℃，100-1500轉(zhuǎn)/min，5-30min，優(yōu)選地，所述高溫震動(dòng)孵化條件 為95℃，1300轉(zhuǎn)/min，10min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述加樣承載緩沖液包括 示蹤核酸分子電泳遷移速度的染料。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述染料分子量相當(dāng)于 50-400bp的DNA，優(yōu)選地，所述染料分子量相當(dāng)于50-150bp的DNA，更優(yōu) 選地，所述染料分子量相當(dāng)于50的DNA。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述電泳檢測(cè)是進(jìn)行凝 膠分析或快速凝膠分析，優(yōu)選地，用1.2％凝膠進(jìn)行電泳分析檢測(cè)。