[發明專利]一種獲得生產PF1022的半知菌無孢霉菌的方法

在審

• 申請號: 201610165289.1
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN107217008A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 陳少欣;劉瑞
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 上海弼興律師事務所31283
• 代理人: 薛琦,沈利

1.一種獲得生產PF1022的半知菌無孢霉菌Rosellinia sp.的方法，其特征在于，其包括以下步驟：

1)將野生的半知菌無孢霉菌Rosellinia sp.PF1022在含有0.1～1.2mol/L的高滲溶液的平板固體培養基中培養，選擇菌落直徑小于5mm、形狀為圓形的單菌落；

2)接種步驟1)所得的單菌落至發酵培養基發酵培養，檢測發酵物中PF1022A的含量，選擇PF1022A含量比出發菌株高的菌株。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中，所述高滲溶液的濃度為0.3～0.9mol/L；所述高滲溶液的溶質為氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈉、山梨醇和蔗糖中的一種或多種；和/或，所述菌落直徑小于4mm。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟1)中，所述高滲溶液的濃度為0.5～0.7mol/L；所述高滲溶液的溶質為氯化鉀或硫酸鎂；和/或，所述菌落直徑小于3mm。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中，所述平板固體培養基為PDA培養基；所述培養的溫度為25～28℃；和/或，所述培養的時間為6～8天。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟1)中，所述PDA培養基為土豆15～20％、葡萄糖2～3％和瓊脂1.5～2％，余量為水，所述百分比為質量體積百分比；所述培養還包括以下的步驟：將野生的半知菌無孢霉菌Rosellinia sp.PF1022稀釋；和/或，所述稀釋后的濃度為10³～10⁴個/ml。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述接種前還包括如下的步驟：接種步驟1)所得的單菌落于斜面培養基中擴大培養得菌落A；所述斜面培養基為PDA培養基；所述擴大培養的溫度為25～28℃；和/或，所述擴大培養的時間為5～8天。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述PDA培養基由土豆15～20％、葡萄糖2～3％和瓊脂1.5～2％組成，余量為水，所述百分比為質量體積百分比。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述擴大培養還包括以下的步驟：挑取步驟1)所得的單菌落，在所述斜面培養基的試管壁上碾碎，再均勻地涂在所述斜面培養基上。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述接種的種子液由包括如下的步驟的方法獲得：將步驟1)所得的單菌落接種在種子培養基中培養。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述檢測包括以下的步驟：向所述發酵物中加入甲醇，超聲后過濾取上清液，HPLC法測定所述上清液中PF1022A的含量。