[發明專利]用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因及應用

在審

• 申請號: 201610165109.X
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105648096A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 程曉蘭;宋鋒林;高玉峰;姜陸;萬雪;岳巧云;王靜;韓雪清;王慧煜
• 申請（專利權）人: 宋鋒林;程曉蘭
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/12
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

1.用于鑒定嗜人按蚊的ＤＮＡ條形碼標準基因，其特征在于：所述用于鑒定嗜人按蚊 的ＤＮＡ條形碼標準基因的核苷酸序列如下所示：

CGTCCTGACTTCGCCATCGCGGGACACATCTGCTGCTGTTTACTACTTGTCTGTCTTCGCGGCCTTTCAACAC AAGTTCCGAGATGCAAGCGATCGACGAGATCTCTCTTACACCTTTATGCACGACTGTGACGTGGTGACCAGCACCAA TCACTGCGTAATTTTCTGTTTGCCAAACTTCTAATTATAAGCGCTCAAGTATGTGTACGTCATGGAA。

2.一種根據權利要求1所述用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因的應用，其特征在 于：將所述的用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因應用于鑒定待檢標本中。

3.根據權利要求2所述的用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因的應用，其特征在 于：所述待檢標本為非成蟲蟲態，殘缺不全的蟲體或成蟲。

4.一種利用權利要求1或2所述用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因鑒定嗜人按蚊 的分子生物學鑒定方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）提取待檢標本的基因組DNA：

（2）使用如下的引物進行PCR擴增，得到PCR產物；

上游引物UP：5’-CCATGACGTACACATACTTG-3’；

下游引物AP：5’-GCTCCATCTACACACAGCGT-3’；

（3）將PCR產物進行電泳分析，如果能擴增出目的條帶，則提取該目的條帶中的產區進 行測序，如果擴增出的產物沒有目的條帶，則能排除該待檢標本為嗜人按蚊的可能性；

（4）測序得到的結果與所述的用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因的同源性在98% 以上時，則能判斷待檢標本為嗜人按蚊。

5.根據權利要求4所述的鑒定嗜人按蚊的分子生物學鑒定方法，其特征在于：步驟（1） 中所述的待檢標本為非成蟲蟲態、殘缺不全的蟲體或成蟲。

6.根據權利要求4所述的鑒定嗜人按蚊的分子生物學鑒定方法，其特征在于：步驟（2） 中所述的PCR的條件為：94℃預變性5min；94℃30s，50℃30s，72℃2min,35個循環；72℃ 延伸2min；

步驟（2）種所述的PCR的體系為：25μLPCR體系：2.5μL10×buffer(含Mg²⁺)，2μLdNTPs (2.5mmol/L)，上下游引物各1μL，0.5μLTaq酶，1μL模板DNA，去離子水定容至25μL；

步驟（2）中所述的PCR在進行時設置陰性對照和陽性對照：

所述的陽性對照為權利要求1所述的用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因或含有 權利要求１所述的用于鑒定嗜人按蚊的DNA條形碼標準基因的序列；

步驟（3）中所述的目的條帶為在分子標記（DNAMarker）240bp條帶位置的電泳帶，或是 與陽性對照同一位置的電泳帶。