[發(fā)明專利]用于谷蠹鑒定及其遺傳學(xué)分析的微衛(wèi)星標(biāo)記

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610164531.3
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105779592B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伍祎;曹陽;汪中明;張濤;石天玉;賀培歡
• 申請（專利權(quán)）人: 國家糧食局科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹;張文祎

本發(fā)明公開了用于谷蠹鑒定及其遺傳學(xué)分析的微衛(wèi)星標(biāo)記。該微衛(wèi)星標(biāo)記為RD1、RD3、RD4、RD5、RD6、RD7、RD8、RD10、RD11、RD12和RD14。本發(fā)明還公開了一種用于谷蠹鑒定及其遺傳學(xué)分析的試劑盒，其包括11對引物。本發(fā)明的11個(gè)谷蠹微衛(wèi)星分子標(biāo)記能夠快速鑒定谷蠹，并在其遺傳學(xué)研究發(fā)面具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)DNA標(biāo)記技術(shù)與應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及用于鑒定谷蠹的微衛(wèi)星標(biāo)記及引物。

背景技術(shù)

谷蠹(Rhizopertha dominica Fabricius)屬鞘翅目(Coleoptera)長蠹科(Bostrichidae)昆蟲。分布于世界各地，以熱帶和亞熱帶地區(qū)發(fā)生最嚴(yán)重，主要發(fā)生在澳洲、大洋洲、印度、阿拉伯半島及我國的長江流域和華南濕熱地區(qū)。其食性復(fù)雜，鉆蛀危害，幼蟲和成蟲均可在糧粒內(nèi)為害，主要有稻谷、大米、小麥、玉米、高粱、豆類、藥材、干果、圖書、皮草及革制品等，所蛀蝕的糧粒重量是自身重量的的5-6倍。谷蠹也可蛀食木材，并喜歡在木質(zhì)內(nèi)潛伏、化踴及越冬，嚴(yán)重破壞倉房的木質(zhì)結(jié)構(gòu)，是世界上最重要的倉儲害蟲之一。

隨著國際間或地區(qū)間糧食及食品貿(mào)易和流通日愈頻繁，谷蠹的傳播、擴(kuò)散日趨嚴(yán)重。準(zhǔn)確快速鑒定糧食及食品加工廠中的谷蠹是害蟲防治的基礎(chǔ)；同時(shí)掌握谷蠹的遺傳變異水平，了解其進(jìn)化過程，闡明其種群擴(kuò)張與暴發(fā)機(jī)制，對預(yù)防與控制谷蠹的入侵具有重要理論與實(shí)踐意義。微衛(wèi)星分子標(biāo)記可實(shí)現(xiàn)谷蠹的快速鑒定及遺傳多樣性研究，是農(nóng)業(yè)害蟲研究的重要分子標(biāo)記工具。

微衛(wèi)星DNA(Microsatellites DNA)是核心序列為1-6個(gè)的寡核苷酸經(jīng)多次重復(fù)形成的串聯(lián)重復(fù)DNA序列，由核心序列和側(cè)翼序列組成，核心序列呈串聯(lián)狀重復(fù)排列，側(cè)翼序列位于核心序列兩側(cè)，是保守的特異單拷貝序列，具有物種特異性。微衛(wèi)星DNA重復(fù)次數(shù)及重復(fù)程度的差異是造成每個(gè)基因座位多態(tài)性的原因，微衛(wèi)星技術(shù)的關(guān)鍵是位點(diǎn)篩選和引物設(shè)計(jì)，根據(jù)微衛(wèi)星DNA兩端的保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，才能擴(kuò)增這個(gè)位點(diǎn)的微衛(wèi)星DNA序列。微衛(wèi)星標(biāo)記具有分布廣泛、多態(tài)性豐富、遺傳共顯性、容易檢測以及重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，是構(gòu)建高密度分子遺傳圖譜、分析物種分類與演化、遺傳多樣性、種群遺傳結(jié)構(gòu)以及基因定位等方面的有效工具，被認(rèn)為是當(dāng)前種內(nèi)遺傳變異研究中分辨率最高、揭示能力最強(qiáng)的分子標(biāo)記。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一組用于谷蠹鑒定及其遺傳學(xué)分析的微衛(wèi)星標(biāo)記。該微衛(wèi)星標(biāo)記不僅可在糧食和食品儲藏領(lǐng)域用于鑒定谷蠹，還對研究谷蠹種群遺傳學(xué)，揭示其在我國及世界范圍內(nèi)的起源、入侵規(guī)律和擴(kuò)散趨勢等具有重要意義。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種用于谷蠹鑒定及其遺傳學(xué)分析的試劑盒，該試劑盒包括針對本發(fā)明所述的微衛(wèi)星位點(diǎn)設(shè)計(jì)的用于谷蠹鑒定及其遺傳學(xué)分析的引物對。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供鑒定谷蠹的方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一組用于谷蠹鑒定及其遺傳學(xué)分析的微衛(wèi)星標(biāo)記，為RD1、RD3、RD4、RD5、RD6、RD7、RD8、RD10、RD11、RD12和RD14，具體地：

RD1為SEQ ID No.1所示的DNA分子，其微衛(wèi)星重復(fù)序列為(TC)₁₈；

RD3為SEQ ID No.2所示的DNA分子，其微衛(wèi)星重復(fù)序列為(TG)₇；

RD4為SEQ ID No.3所示的DNA分子，其微衛(wèi)星重復(fù)序列為(CT)₁₇；

RD5為SEQ ID No.4所示的DNA分子，其微衛(wèi)星重復(fù)序列為(TC)₁₀；

RD6為SEQ ID No.5所示的DNA分子，其微衛(wèi)星重復(fù)序列為(TC)₁₈；