[發明專利]用于谷蠹鑒定及其遺傳學分析的微衛星標記

有效

• 申請號: 201610164531.3
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105779592B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 伍祎;曹陽;汪中明;張濤;石天玉;賀培歡
• 申請（專利權）人: 國家糧食局科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹;張文祎

本發明公開了用于谷蠹鑒定及其遺傳學分析的微衛星標記。該微衛星標記為RD1、RD3、RD4、RD5、RD6、RD7、RD8、RD10、RD11、RD12和RD14。本發明還公開了一種用于谷蠹鑒定及其遺傳學分析的試劑盒，其包括11對引物。本發明的11個谷蠹微衛星分子標記能夠快速鑒定谷蠹，并在其遺傳學研究發面具有重要意義。

技術領域

本發明屬于分子生物學DNA標記技術與應用領域，具體涉及用于鑒定谷蠹的微衛星標記及引物。

背景技術

谷蠹(Rhizopertha dominica Fabricius)屬鞘翅目(Coleoptera)長蠹科(Bostrichidae)昆蟲。分布于世界各地，以熱帶和亞熱帶地區發生最嚴重，主要發生在澳洲、大洋洲、印度、阿拉伯半島及我國的長江流域和華南濕熱地區。其食性復雜，鉆蛀危害，幼蟲和成蟲均可在糧粒內為害，主要有稻谷、大米、小麥、玉米、高粱、豆類、藥材、干果、圖書、皮草及革制品等，所蛀蝕的糧粒重量是自身重量的的5-6倍。谷蠹也可蛀食木材，并喜歡在木質內潛伏、化踴及越冬，嚴重破壞倉房的木質結構，是世界上最重要的倉儲害蟲之一。

隨著國際間或地區間糧食及食品貿易和流通日愈頻繁，谷蠹的傳播、擴散日趨嚴重。準確快速鑒定糧食及食品加工廠中的谷蠹是害蟲防治的基礎；同時掌握谷蠹的遺傳變異水平，了解其進化過程，闡明其種群擴張與暴發機制，對預防與控制谷蠹的入侵具有重要理論與實踐意義。微衛星分子標記可實現谷蠹的快速鑒定及遺傳多樣性研究，是農業害蟲研究的重要分子標記工具。

微衛星DNA(Microsatellites DNA)是核心序列為1-6個的寡核苷酸經多次重復形成的串聯重復DNA序列，由核心序列和側翼序列組成，核心序列呈串聯狀重復排列，側翼序列位于核心序列兩側，是保守的特異單拷貝序列，具有物種特異性。微衛星DNA重復次數及重復程度的差異是造成每個基因座位多態性的原因，微衛星技術的關鍵是位點篩選和引物設計，根據微衛星DNA兩端的保守序列設計特異性引物，才能擴增這個位點的微衛星DNA序列。微衛星標記具有分布廣泛、多態性豐富、遺傳共顯性、容易檢測以及重復性好等優點，是構建高密度分子遺傳圖譜、分析物種分類與演化、遺傳多樣性、種群遺傳結構以及基因定位等方面的有效工具，被認為是當前種內遺傳變異研究中分辨率最高、揭示能力最強的分子標記。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一組用于谷蠹鑒定及其遺傳學分析的微衛星標記。該微衛星標記不僅可在糧食和食品儲藏領域用于鑒定谷蠹，還對研究谷蠹種群遺傳學，揭示其在我國及世界范圍內的起源、入侵規律和擴散趨勢等具有重要意義。

本發明的第二個目的是提供一種用于谷蠹鑒定及其遺傳學分析的試劑盒，該試劑盒包括針對本發明所述的微衛星位點設計的用于谷蠹鑒定及其遺傳學分析的引物對。

本發明的第三個目的是提供鑒定谷蠹的方法。

為達到上述目的，本發明采用下述技術方案：

本發明提供一組用于谷蠹鑒定及其遺傳學分析的微衛星標記，為RD1、RD3、RD4、RD5、RD6、RD7、RD8、RD10、RD11、RD12和RD14，具體地：

RD1為SEQ ID No.1所示的DNA分子，其微衛星重復序列為(TC)₁₈；

RD3為SEQ ID No.2所示的DNA分子，其微衛星重復序列為(TG)₇；

RD4為SEQ ID No.3所示的DNA分子，其微衛星重復序列為(CT)₁₇；

RD5為SEQ ID No.4所示的DNA分子，其微衛星重復序列為(TC)₁₀；

RD6為SEQ ID No.5所示的DNA分子，其微衛星重復序列為(TC)₁₈；