[發明專利]肉鴨細小病毒滅活疫苗

在審

• 申請號: 201610163941.6
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105688204A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 魏思遠;趙光偉
• 申請（專利權）人: 重慶三杰眾鑫生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/23
• 分類號: A61K39/23;A61P31/20
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 高姜

技術領域

本發明涉及一種肉鴨細小病毒滅活疫苗，主要涉及疫苗領域。

背景技術

2014年11月以來，我國部分地區肉鴨流行一種以臨床癥狀為鴨喙發育不良，舌頭 外露、腫脹、向下彎曲，發病率為10-30％，如無細菌、病毒繼發感染，則死亡率一般低于3％。 鴨發病表現為2個階段，第一階段為7～13日齡，癥狀為站立不穩，蹼外翻，強行驅趕時跛行 或翻滾；第二階段為21～28日齡，在第一階段基礎上，病鴨主要表現為運動障礙，跟不上大 群，呈蹲坐式或側臥，表現出喙短、舌頭外露癥狀。患病鴨料肉比正常鴨高30％以上，同日齡 出欄體重比正常鴨低20％以上，且發育不整齊，屠宰時易翅膀和腿骨折。禽病專家刁有祥等 最先分離到病原，基因序列鑒定與鵝細小病毒同源性大于98％，與番鴨細小病毒同源性為 77％左右，命名為鴨細小病毒。

該病無疫苗用于預防，常規的抗病毒和抗菌治療方法基本無效，即使用肉鴨細小 病毒特異性抗體進行治療，雖然效果較好，但鴨子患病期間料肉比高，且會發生部分死亡， 相應地提高了養殖成本等，屠宰后有喙短舌頭外露的肉鴨酮體價格比正常鴨低10％，對鴨 養殖業造成巨大經濟損失。

發明內容

針對以上現有技術的不足，本發明提出一種預防肉鴨細小病毒的肉鴨細小病毒滅 活疫苗。

為達到上述目的，本發明的技術方案是：肉鴨細小病毒滅活疫苗，包括種毒、抗原 制備、抗原的鑒定、滅活疫苗制備和疫苗檢驗，其特征在于，制備抗原之后，進行抗鴨細小病 毒特異性血清制備，對抗原進行無菌和病毒含量檢測，無菌檢驗合格、病毒含量大于等于 10^-6.0ELD₅₀/0.1ml的抗原用終濃度為0.2％甲醛于室溫滅活24小時，期間振搖3次，每次3分 鐘，進行無菌和滅活檢驗合格，按油相：水相1:1乳化，制成油乳劑滅活疫苗并檢驗合格，按 如下免疫程序免疫健康鴨20只，用于制備抗鴨細小病毒特異性血清。

首免：腿部肌肉注射油乳劑滅活疫苗0.5ml。

二免：頸部皮下注射油乳劑滅活疫苗1.0ml。

三免：胸部肌肉分點注射油乳劑滅活疫苗1.5ml。

三免結束后21日，宰殺鴨子，收集血液，于4℃、12000rpm離心，分離血清，加入終濃 度為0.1％甲醛于室溫滅活24小時，期間振搖3次，每次3分鐘，加入過濾除菌，進行無菌合 格，檢測鴨細小病毒瓊擴抗體效價為1:32，結果同時也說明抗原的免疫原性良好。

進一步，滅活疫苗的制備為滅活抗原加入鴨白細胞介素2，使鴨白細胞介素2終濃 度為5μg/ml，滅活前的鴨細小病毒含量大于等于10^-6.⁵⁰ELD₅₀/0.1ml，分裝，2-8℃保存，即為 肉鴨細小病毒白細胞介素2佐劑滅活疫苗。

本發明的技術效果如下：制備的肉鴨細小病毒白細胞介素2佐劑滅活疫苗于2015 年10月-2015年12月在山東聊城、菏澤等地的8個、曾經發生過該病的肉鴨養殖場進行了臨 床預防試驗，共計34000羽櫻桃谷肉鴨在2日齡進行了免疫，0.5ml/只，至全部鴨出欄，平均 預防保護率96.45％，零星發生肉鴨細小病毒的鴨子按常規治療方法效果較佳，基本無喙變 短、舌頭外露癥狀出現。

結果說明該疫苗的臨床預防效果良好，零星發病的鴨子未能保護可能與接種疫苗 過程中針頭刺穿皮膚，導致部分疫苗外流，接種劑量不足。或是本身鴨子為弱雛，機體免疫 反應較差，疫苗接種后保護性抗體產生較低，不足以抵抗野毒感染有關。即使鴨子發生細小 病毒病，由于有部分抗體存在，在采取常規治療方法時效果也較好，比這些養殖場未免疫過 肉鴨細小病毒白細胞介素2佐劑滅活疫苗以前發病后的治療效果要好。

具體實施方式

實施例

第一步種毒

從感染鴨細小病毒的病鴨肝臟中分離、鑒定，經易感鴨胚傳代12代獲得。

第二步抗原制備

將肉鴨細小病毒種毒用生理鹽水20000倍稀釋，經尿囊腔接種11日齡易感鴨胚， 0.1ml/胚，收集接種60～120小時死亡鴨胚尿囊液，無菌檢驗合格，即為抗原，于-40℃保存。 同時取樣進行無菌和病毒含量檢測。

第三步抗鴨細小病毒特異性血清制備