[發(fā)明專利]一種絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610163915.3
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105724254B
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發(fā)明（設計）人: 燕麗萍;劉翠蘭;吳德軍;李麗;任飛;安小林
• 申請（專利權）人: 山東省林業(yè)科學研究院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;A01H4/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權代理有限公司37221
• 代理人: 李健康

技術領域

本發(fā)明涉及一種體胚誘導培養(yǎng)基，尤其涉及一種從絨毛白蠟胚性愈傷組織誘導出體細胞胚的培養(yǎng)基，即絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基；屬于白蠟組織培養(yǎng)技術。

背景技術

絨毛白蠟(Fraxinus velutina Torr.)為木犀科(oleaceae)白蠟屬(Fraxinus)落葉喬木，是我國北方重要的造林樹種，尤其在鹽堿地區(qū)是重要的耐鹽堿喬木樹種，耐鹽堿，抗旱澇，耐瘠薄，抗逆性強，適應范圍廣，且具有美觀、速生、材優(yōu)等特性，在園林綠化、用材林、防護林建設中廣泛應用。近年來，初步建立了絨毛白蠟植物組織培養(yǎng)技術體系，陳之群等(2006)以絨毛白蠟莖段為外植體，通過腋芽增殖途徑獲得再生植株；王磊等(2008)以絨毛白蠟成熟胚和莖段為外植體，研究了其組織培養(yǎng)和植株再生技術，平均增殖系數(shù)為3.59，存在繁育增殖率低及生根率低等缺陷。迄今為止，有關植物組織培養(yǎng)技術的各類文獻中，尚未見關于絨毛白蠟體胚誘導的研究報道。

體胚誘導組織培養(yǎng)技術體系不僅是轉基因最理想的受體系統(tǒng)，也是種苗快速繁育的有效方法之一。開發(fā)一種從絨毛白蠟胚性愈傷組織誘導出體細胞胚的培養(yǎng)基，即絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基有望為快速繁育和創(chuàng)制絨毛白蠟優(yōu)良新種質提了新途徑。

發(fā)明內容

針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的是提供一種絨毛白蠟離體葉片體胚誘導的培養(yǎng)基，用于絨毛白蠟優(yōu)良種質大規(guī)模繁育生產(chǎn)和新種質創(chuàng)制研究。

本發(fā)明所述的絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基，是將6-芐基腺嘌呤(6-BA)，萘乙酸(NAA)，2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，蔗糖和瓊脂，溶解于MS鹽分+B₅有機基本培養(yǎng)基中制得，其pH值為5.2–5.4；其特征在于：

所述絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基的組分用量以1L有機基本培養(yǎng)基的加入量計為：

其中，上述MS鹽分+B₅有機基本培養(yǎng)基的組分為：

KNO₃ 1900mg·L^-1，NH₄NO₃ 1650mg·L^-1，MgSO₄·7H₂O 370mg·L^-1，KH₂PO₄ 170mg·L^-1，CaCl₂·2H₂0 440mg·L^-1，MnSO₄·4H₂O 22.3mg·L^-1，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg·L^-1，H₃BO₃6.2mg·L^-1，KI 0.83mg·L^-1，NaMoO₄·2H₂O 0.25mg·L^-1，CuSO₄·5H₂O 0.025mg·L^-1，CoCl₂·6H₂O 0.025mg·L^-1，Na₂-EDTA 37.3mg·L^-1，F(xiàn)eSO₄·7H₂0 27.8mg·L^-1，維生素B₁10mg·L^-1，維生素B₆1mg·L^-1，葉酸0.5mg·L^-1，肌醇100mg·L^-1，甘氨酸2.0mg·L^-1。

上述的絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基優(yōu)選的實施方式是：所述絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基的組分用量以1L有機基本培養(yǎng)基的加入量計為：

本發(fā)明公開的絨毛白蠟離體葉片體胚誘導培養(yǎng)基中，MS鹽分+B₅有機為基本培養(yǎng)基，提供植物組織生長的所需無機和有機營養(yǎng)元素，添加植物生長調節(jié)劑6-芐基腺嘌呤(BA)，萘乙酸(NAA)和2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)促進形成體胚的作用；添加高濃度的蔗糖提供組織生長發(fā)育的碳素營養(yǎng)；添加瓊脂是固化培養(yǎng)基，起支撐作用。