[發(fā)明專利]迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610163855.5
• 申請(qǐng)日: 2016-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN107217087B
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫冰;王林;徐偉;文松
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石油化工股份有限公司青島安全工程研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12Q1/6844;C12Q1/06;C12M1/36;C12M1/34
• 代理公司: 31251 上海碩力知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 王曉武

1.一種迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，在液體樣品中細(xì)菌含量測(cè)量裝置上，進(jìn)行液體樣品中細(xì)菌含量的測(cè)量；所述裝置包括箱體、細(xì)菌富集和核酸分子提取設(shè)備，所述細(xì)菌富集和核酸分子提取設(shè)備包括試劑管放置位置(1)和試劑管放置位置(4)、濾膜(2)、吸附層(3)反應(yīng)池(5)、光源(6)、濾光片(7)、感光器(8)以及至少四個(gè)閥門，所述試劑管放置位置(1)底部與濾膜(2)上方空間連通，濾膜(2)下方空間分為兩路，一路與閥門a入口端相連，另一路與閥門b入口端相連，閥門a出口端與廢液池相連，閥門b出口端通過管道與吸附層(3)入口側(cè)相連，吸附層(3)出口側(cè)的管道分為兩路，一路與閥門c入口端相連，閥門c出口端與廢液池相連，另一路經(jīng)過閥門d后與反應(yīng)池(5)相連；試劑管放置位置(4)底部與通過管道與閥門b與吸附層入口側(cè)之間的管道相連；光源(6)為反應(yīng)池(5)提供染料分子激發(fā)能量，產(chǎn)生的熒光透過濾光片(7)后由感光器(8)接收；濾膜(2)上方空間的頂部、試劑管放置位置(4)的底部均設(shè)有金屬尖刺，當(dāng)試劑管放置在試劑管放置位置(1)或試劑管放置位置(4)上時(shí)可以刺破試劑管底部的鋁箔；油田污水和成品油中細(xì)菌含量的測(cè)量步驟包括：

(a)在試劑管中裝入樣品，放置于試劑管放置位置(1)，試劑管底部鋁箔包裝被下部金屬尖刺破，液體流入濾膜上方，小于濾膜孔徑的液體穿過濾膜后進(jìn)入廢液池；

(b)當(dāng)試劑管中的樣品全部流過濾膜后，程序自動(dòng)控制試劑管更替為預(yù)置在箱體內(nèi)的盛裝乙醇溶液的試劑管，重復(fù)上述加壓流程以沖洗濾膜，然后繼續(xù)自動(dòng)控制試劑管更替為盛裝去離子水或緩沖液的試劑管進(jìn)行沖洗操作；

(c)對(duì)濾膜的沖洗完成后，在試劑管放置位置(1)上更換為盛裝細(xì)菌裂解液的試劑管，將試劑管中的細(xì)菌裂解液流經(jīng)吸附層(3)后進(jìn)入廢液池；

(d)在試劑管放置位置(4)上放置盛裝洗滌液的試劑管進(jìn)行沖洗，移除細(xì)菌裂解液中的雜質(zhì)；

(e)沖洗結(jié)束后，在試劑管放置位置(4)上放置盛裝緩沖液的試劑管，緩沖液流經(jīng)吸附層3時(shí)將DNA洗脫下來，沖洗至反應(yīng)池(5)；

(f)當(dāng)核酸放大反應(yīng)在反應(yīng)池(5)中發(fā)生時(shí)，光源(6)發(fā)出的光激發(fā)反應(yīng)池(5)中的染料分子，產(chǎn)生的熒光由感光器(8)接收，染料分子的濃度與溶液中核酸分子的濃度正相關(guān)，由此判斷核酸分子的初始濃度；

當(dāng)試劑管放置在試劑管放置位置(1)上時(shí)，在試劑管上部放置活塞，將試劑管中的試劑向下壓入濾膜(2)上方的空間中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，其特征在于所述細(xì)菌富集和核酸分子捕捉設(shè)備集成在所述箱體內(nèi)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，其特征在于閥門a～閥門d為程序控制的電磁閥，或采用微流控的微閥技術(shù)，由氣泵控制其開關(guān)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，其特征在于反應(yīng)池(5)的上方為開口或透光性材料，內(nèi)部預(yù)置反應(yīng)母液或冷凍干燥后的試劑球，核酸洗脫液流入反應(yīng)池(5)后與預(yù)置溶液或試劑球混合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，其特征在于感光器(8)出的信號(hào)被送至信號(hào)處理單元進(jìn)行分析。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，其特征在于試劑管放置位置(1)或(4)置于較高位置，便于液體下流至較低位置。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，其特征在于當(dāng)采用PCR方法時(shí)，需要在反應(yīng)池(5)周邊設(shè)置快速加熱-冷卻模塊以實(shí)現(xiàn)變性-退火-延伸的溫度循環(huán)；當(dāng)采用等溫放大方法的時(shí)候，反應(yīng)池周圍只需要設(shè)置加熱模塊即可。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述迅速測(cè)量油田污水和成品油中細(xì)菌含量的方法，其特征在于試劑管的更換通過自動(dòng)控制系統(tǒng)完成。