[發(fā)明專利]針對2種按蚊檢測的探針、基因芯片和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610163704.X
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105695594B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 廉國勝;田綠波;楊澤;林繼燦;汪海波;柯明劍;莫秋華;伍碧梅;閆文蓮;蘇影
• 申請（專利權(quán)）人: 珠海國際旅行衛(wèi)生保健中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C40B40/06
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 吳澤燊

本發(fā)明屬于生物檢測鑒定領(lǐng)域，涉及針對2種按蚊(中華按蚊、大劣按蚊)檢測的探針、基因芯片和方法。一種針對2種按蚊檢測的探針，包括：用于檢測中華按蚊的探針：3’?CCTCATTCTTTGAYCCAGCTG?5’；和用于檢測大劣按蚊的探針：3’?CACCAGATATAGCATTTCCTC?5’。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測鑒定領(lǐng)域，涉及針對2種按蚊(中華按蚊、大劣按蚊)檢測的探針、基因芯片和方法。

背景技術(shù)

按蚊，蚊科(Culicidae)按蚊亞科(Anophelinae)按蚊屬(Anopheles)昆蟲的統(tǒng)稱。按蚊廣布全世界，已知近450種和亞種，分歸于6個亞屬，但中國僅有按蚊亞屬和塞蚊亞屬，共約60種和亞種。按蚊傳播瘧疾，對人類的健康帶來危害。瘧疾是經(jīng)按蚊叮咬或輸入帶瘧原蟲者的血液而感染瘧原蟲所引起的蟲媒傳染病。寄生于人體的瘧原蟲共有四種，即間日瘧原蟲，三日瘧原蟲，惡性瘧原蟲和卵形瘧原蟲。在我國主要是間日瘧原蟲和惡性瘧原蟲。

中華按蚊(Anophelessinensis)是中國記述最早和研究最廣的蚊蟲，是中國廣大平原地區(qū)傳播瘧疾的重要媒介，也是馬來絲蟲病的重要媒介之一。有些地區(qū)也曾從這種按蚊分離到流行性乙型腦炎病毒。大劣按蚊(Anopheles dirus)，分布于海南島的山林地區(qū)，是當?shù)丿懠矀鞑サ闹匾浇椤４送猓瑥V西、云南和西藏也有記載。這種按蚊也是東南亞瘧疾傳播的重要媒介之一。

目前，口岸媒介生物的傳統(tǒng)鑒定方法為形態(tài)學(xué)鑒定方法，主要是依據(jù)有形態(tài)學(xué)鑒定經(jīng)驗、具有媒介生物形態(tài)鑒定知識的實驗室專業(yè)人員根據(jù)醫(yī)學(xué)媒介分類檢索表進行種類鑒定。受限于鑒定人員的經(jīng)驗積累、專業(yè)要求、標本完整性與發(fā)育階段，傳統(tǒng)媒介蚊種鑒定方法存在著鑒定專家數(shù)量有限、鑒定周期長、鑒定效率低等問題。比如，首先，傳統(tǒng)的分類方法在鑒定蚊蟲復(fù)合體、近緣種存在一定困難；其次，在國境口岸蚊媒監(jiān)測和交通工具等的衛(wèi)生檢疫工作中，受不同的采集工具、采集方法的影響以及標本運送過程的限制，當專業(yè)技術(shù)人員鑒定時，許多蚊蟲標本已經(jīng)是殘缺不全，往往是腹部鱗片或翅等重要體征脫落或受損，難以進行準確的形態(tài)分類；再次，對于截獲的卵、幼蟲和蛹，整個鑒定過程大致需要數(shù)周的時間，由于鑒定特征細微難辨，往往需要培養(yǎng)至成蟲再鑒定，如果是少見的國外種類，還要請國外專家協(xié)助鑒定，鑒定所需的時間就更多了。

近年來，分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，顯示了在蚊類鑒別應(yīng)用中的極大潛力，形成了許多分子鑒別方法，成為解決當前蚊蟲分類難題的新鑰匙。

基因芯片技術(shù)系指將大量探針分子固定于支持物上后與標記的樣品分子進行雜交，通過檢測每個探針分子的雜交信號強度進而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。基因芯片主要用于基因檢測工作。基因芯片技術(shù)由于同時將大量探針固定于支持物上，所以可以一次性對樣品大量序列進行檢測和分析，從而解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交技術(shù)操作繁雜、自動化程度低、操作序列數(shù)量少、檢測效率低等不足。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了針對2種按蚊檢測的探針、基因芯片和方法。

首先，本發(fā)明的內(nèi)容包括針對2種按蚊檢測的探針，包括：

用于檢測中華按蚊的探針：3’-CCTCATTCTTTGAYCCAGCTG-5’，如序列表Seq IDNo.1所示；

和用于檢測大劣按蚊的探針：3’-CACCAGATATAGCATTTCCTC-5’如序列表Seq IDNo.2所示。

進一步地，本發(fā)明的內(nèi)容還包括一種針對2種按蚊檢測的基因芯片，包括上述探針。

進一步地，所述的基因芯片，還包括質(zhì)控探針：3’-NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-5’，如序列表Seq ID No.3所示。

進一步地，所述探針和質(zhì)控探針的3′端加入6個堿基T且3′末端氨基修飾作為連接臂，使其固定在芯片上。