[發明專利]用于鑒定致倦庫蚊的DNA條形碼標準基因及應用

在審

• 申請號: 201610162684.4
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105695593A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 程曉蘭;宋鋒林;高玉峰;姜陸;萬雪;岳巧云;王靜;韓雪清;王慧煜
• 申請（專利權）人: 宋鋒林;程曉蘭
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/12
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種用于鑒定致倦庫蚊的DNA條形碼標準基 因及應用。

背景技術

目前，國內外對媒介生物的分類鑒定主要依靠傳統的形態學分類手段。該方法主 要針對成蟲階段，對衛生監管實際工作中捕獲的其他發育階段（幼蟲、蛹等）的媒介生物則 受到限制；對外部形態相似的近緣種媒介生物的鑒定，形態學分類方法的準確度偏低；另 外，實際工作中經常會采集到不完整的樣品，形態學方法對殘缺樣品的鑒定遇到很多困難。 在口岸檢疫工作中，如果截獲的是幼蟲、卵、蛹等非成蟲蟲態，通常需要將其培養成成蟲后 再進行鑒定，整個檢疫鑒定過程時間長達數周，也經常會采集到不完整的樣品，形態學方法 對殘缺樣品的鑒定遇到很多困難，大大地加長了通關周期，影響貿易往來。

近代分子生物學技術的興起，為古老的昆蟲學科注入了新的活力。在昆蟲學研究 領域，分子生物學技術主要應用于系統演化及分類鑒定兩方面。昆蟲系統演化的研究是從 分子水平上找出其種間的DNA序列的特異性差異，主要目的為探索昆蟲種、屬間的相對親緣 關系，同時也為昆蟲的分子鑒定奠定了基礎。

DNA分類是以生物的DNA序列的差異為依據，來區分生物物種并構建全新的分類學 系統(Tautzetal.,2002)。在生物分類中，以DNA序列作為生物物種識別的方法最初應用 于病毒、細菌和原生動物類群的研究中，后來這種方法廣泛應用于物種多樣性的調查研究 中，并積累了大量的數據和文獻。2003年，DNA條形碼概念首次提出：鑒定物種就如同使用商 品UPC條形碼，使用掃描儀就能識別。它的原理是利用基因組DNA上一段標準的或者大家公 認的基因片段，作為分子靶標來進行種級水平的種類鑒定。DNA條形碼序列與整個基因組 DNA相比要短得多，而且非常容易獲得。因為COI基因的通用引物可以很容易獲得絕大多數 動物的5’端序列，加拿大圭爾夫大學的學者Hebert等提出利用COI的特定區段來做DNA條 形編碼的基礎，用于物種識別(Hebertetal.,2003;Remigio&Herbert,2003)。理論 上，DNA序列上的每個位點都有A、T、G、C四種可能，45個堿基的序列就可以區分開近10億個 物種，這遠遠超過現存物種的總數，即使由于自然選擇的原因，某些位點已經被固定，導致 組合數減少一些，但是現代分子技術可以很容易的擴增出幾百個堿基的序列，足夠區分所 有的物種(肖金花等，2004)。而且DNA序列屬于數字信息，方便管理又具有可重復性，易于 交流和聯合分析（Hebertetal.,2003）。

DNA條形碼技術為物種的鑒定提供了新的手段，彌補了傳統分類的諸多不足。尤其 適用于難以用形態分類特征進行鑒定的幼蟲、卵等蟲態。利用分子標記進行種類鑒定國際 上已有不少的嘗試，國際上第一篇利用DNA條形碼進行物種鑒定的是2003年Hebert，隨后 Ball等(2005)嘗試用分子條形碼鑒別了70多種水生蜉蝣，游中華等(2007)用線粒體COI鑒 別了入侵害蟲西花薊馬及其他8種常見薊馬。肖金花等中國衛生檢驗雜志2011年3月第21卷 第3期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Mar2011;Vol21No3 615(2004)綜述了線粒體COI片段在物種鑒定方面的獨特優點，并指出DNA條形碼技術為生 物分類學的新動向。

但由于目前DNA條形碼數據庫中種類不全，缺乏多個物種的標準DNA條形碼參考序 列，致使DNA條形碼鑒定技術達不到實際應用的目的。

致倦庫蚊為疾病的重要傳播媒介，不僅對間日瘧原蟲易感，而對惡性瘧原蟲也有 較高的易感性，是我國班氏絲蟲病的主要傳播媒介，曾從致倦庫蚊中分離到登革病毒。在檢 驗檢疫工作中，經常會截獲的是幼蟲、卵、蛹等非成蟲蟲態，或者肢體殘缺的樣品通常需要 將其培養成成蟲后再進行鑒定，整個檢疫鑒定過程時間長達數周，也經常會采集到不完整 的樣品，形態學方法對殘缺樣品的鑒定遇到很多困難。

發明內容

本發明的首要目的是克服上述不足問題，提供一種用于鑒定致倦庫蚊的DNA條形 碼標準基因。

本發明的另一目在于提供一種用于鑒定致倦庫蚊的DNA條形碼標準基因的應用方 法。

本發明為實現上述目的所采用的技術方案是：用于鑒定致倦庫蚊的ＤＮＡ條形碼 標準基因，其特征在于：所述用于鑒定致倦庫蚊的ＤＮＡ條形碼標準基因的核苷酸序列如 下所示：