[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)外源插入片段的旁側(cè)序列

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610160733.0
• 申請(qǐng)日: 2016-03-21
• 公開（公告）號(hào): CN105754996B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林秀峰;金永梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/6895
• 代理公司: 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

本發(fā)明提供一種轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)外源插入片段的旁側(cè)序列，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，用于吉生粳3號(hào)品系特異性PCR檢測(cè)。旁側(cè)序列為3’端旁側(cè)序列，序列如SEQ ID NO.7所示，提供了T?DNA 3’端和5’端的巢式引物序列，以待測(cè)水稻總DNA為模板，通過基因組步移方法和熱不對(duì)稱PCR方法，用所述引物進(jìn)行PCR檢測(cè)，分離T?DNA序列3’旁側(cè)序列，本發(fā)明所分離的外源插入片段的旁側(cè)序列可以進(jìn)一步用于建立吉生粳3號(hào)品系特異性PCR檢測(cè)方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種轉(zhuǎn)基因水稻品系吉生粳3號(hào)的外源插入片段的旁側(cè)序列，用于吉生粳3號(hào)品系特異性PCR檢測(cè)方法中。

背景技術(shù)

水稻是我國(guó)乃至全世界最重要的糧食作物之一。目前，全球轉(zhuǎn)基因水稻研究進(jìn)展迅速，涉及抗蟲、抗病、抗除草劑、品質(zhì)和農(nóng)藝性狀改良等多方面內(nèi)容。我國(guó)轉(zhuǎn)基因水稻研發(fā)與世界同步，其中抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻處于世界領(lǐng)先水平。對(duì)轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行品系特異性檢測(cè)是對(duì)轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行監(jiān)督管理，保障其健康發(fā)展的重要技術(shù)基礎(chǔ)。而轉(zhuǎn)基因植物的外源插入片段的旁側(cè)序列是轉(zhuǎn)基因植物品系特異性檢測(cè)方法的重要技術(shù)資料。基因組步移技術(shù)(Genome walking)是目前廣泛利用于分離外源插入片段旁側(cè)序列的簡(jiǎn)單有效方法之一。它是從外源插入片段的已知序列出發(fā)，逐步探知其旁鄰的未知序列或與已知序列呈線性關(guān)系的目標(biāo)序列的方法。目前已經(jīng)有部分專利和文獻(xiàn)報(bào)道了轉(zhuǎn)基因植物外源插入片段旁側(cè)序列，然而還沒有任何關(guān)于轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)外源插入片段旁側(cè)序列的文章和專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)外源插入片段的旁側(cè)序列，用于吉生粳3號(hào)品系特異性PCR檢測(cè)。

轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)外源插入片段的旁側(cè)序列，所述旁側(cè)序列為3’端旁側(cè)序列，該3’端旁側(cè)序列如SEQ ID NO.7所示。

所述的轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)外源插入片段的旁側(cè)序列的制備方法，包括提取轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)的基因組DNA，通過基因組步移方法和熱不對(duì)稱PCR方法分離得到。

轉(zhuǎn)基因水稻吉生粳3號(hào)外源插入片段的旁側(cè)序列在吉生粳3號(hào)品系特異性PCR檢測(cè)方法中的應(yīng)用。

本發(fā)明利用基因組步移方法和熱不對(duì)稱PCR方法分離得到外源插入片段的3’端旁側(cè)序列732bp,其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。通過比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，該序列包括轉(zhuǎn)化載體序列部分和水稻基因組序列部分，載體序列部分即SEQ ID NO.7中的1-68位核苷酸序列與載體的部分序列完全相同,水稻基因組序列部分即SEQ ID NO.7中68-732位核苷酸序列與水稻日本晴品種2號(hào)染色體上(GenBank登記號(hào)：NC_029257.1)的2790589-2789925bp區(qū)段核苷酸序列具有99％的相似性。因此，外源插入片段在吉生粳3號(hào)基因組中的插入位點(diǎn)可判斷為2790589位。通過5’端巢式PCR方法進(jìn)一步驗(yàn)證了插入位點(diǎn)的準(zhǔn)確性。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是首次分離了轉(zhuǎn)基因水稻品系吉生粳3號(hào)的3’端旁側(cè)序列，并確定了外源基因在水稻基因組中的插入位點(diǎn)。本發(fā)明所分離的外源插入片段的旁側(cè)序列可以進(jìn)一步用于建立吉生粳3號(hào)品系特異性PCR檢測(cè)方法。

附圖說(shuō)明

圖1吉生粳3號(hào)熱不對(duì)稱PCR擴(kuò)增結(jié)果圖，圖中：

M：λ-Hind Ⅲ digest DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；1-3：AP1的1st、2nd、3rd PCR產(chǎn)物；4-6：AP2的1st、2nd、3rd PCR產(chǎn)物；7-9：AP3的1st、2nd、3rd PCR產(chǎn)物；10-12：AP4的1st、2nd、3rd PCR產(chǎn)物；

圖2是5’端巢試PCR擴(kuò)增結(jié)果圖，圖中：