[發明專利]一種虎眼萬年青的葉片種苗快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201610158541.6
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105815214B
• 公開（公告）日: 2018-01-02
• 發明（設計）人: 楊寶明;黃玉玲;李永平
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院農業環境資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司11212
• 代理人: 談杰

1.一種虎眼萬年青的葉片種苗快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)外植體的滅菌

晴天選擇生長健壯，無病、蟲害植株的葉片，剪去不要部份，自來水下沖洗干凈，在無菌工作臺上，用75％的酒精浸泡20秒，然后用0.1％升汞溶液浸泡8分鐘，再用無菌水沖洗5-6次，最后用無菌紙吸去外植體表面水份；

(2)外植體銹導培養

將滅菌的葉片切為0.5×0.5cm大小的塊狀，接種到誘導培養基上，在溫度：25-27℃，光照強度：2500-2600Lux，光照時間：每天10小時的條件下，培養60-70天，誘導出芽叢； 培養25-30天，切口處開始產生愈傷組織； 40-50天分化出小芽，60-70天形成大量芽叢； 外植體誘導分化率達90％；

(3)增殖培養

將誘導培養獲得的芽叢，進行分割，每叢含2-3小芽，接種到增殖培養基上，在溫度：25-27℃，光照強度：2500-2600Lux，光照時間：每天10小時的條件下，培養30天，可獲得大量小苗，實現芽叢的增殖；

(4)生根培養

將增殖培養中獲得的高度達1cm左右的小苗，分割為單株，接種到生根培養基上，在溫度：25-27℃，光照強度：2500-2600Lux，光照時間：每天10小時的條件下，培養30-40天，得帶鱗莖，高度達4-5cm的生根苗，生根率達100％；

(5)生根苗的移栽、馴化

選擇生長健壯，良好根系發達的生根苗，在清水中將培養基清洗干凈，不要傷根系，用75％早基托布津2000倍液浸泡3-5分鐘，然后移栽到基質中，并保持60-65％的空氣濕度，定植50-60天，即可進行大田移栽，其中基質的配比為：腐葉土:生紅土:珍珠巖＝6:3:1；

所述步驟(2)中，滅菌的葉片切為0.5×0.5cm大小的塊狀，接種到誘導培養基上，誘導培養基的組分及其含量為：MS+6-BA2.5-3.0mg.L^-1+NAA0.2-0.25mg.L^-1+糖30g.L^-1+活性碳0.5-1mg.L^-1+瓊脂4g.L^-1，該培養基的PH為5.6-5.8；

所述步驟(3)中，將誘培養獲得的芽叢進行分割，每叢含有2-3小芽，接種到增殖培養基上，增殖培養基的組份及其含量為：MS+6-BA1.5-2.0mg.L^-1+NAA0.1-0.2mg.L^-1+糖30g.L^-1+活性炭0.5-1.0g.L^-1+瓊脂4g.L^-1，該培養基的PH為5.6-5.8；

所述步驟(4)中，將增殖培養中獲得的高度達1cm左右的小苗，分割為單株，接種到生根培養基上，生根培養基的組份及其含量為：

MS+NAA0.4-0.5mg.L^-1+IAA0.1-0.2mg.L^-1+糖30g.L^-1+活性炭0.5-1g.L^-1+瓊脂4g.L^-1，該培養基PH值為5.6-5.8。