[發明專利]抗PD-L1納米抗體及其編碼序列和用途

有效

• 申請號: 201610158493.0
• 申請日: 2016-03-18
• 公開（公告）號: CN107216389B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 丁航海;黃仲廉
• 申請（專利權）人: 和邁生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;G01N33/68;G01N33/574;A61K39/395;A61K47/68;A61K51/10;A61P35/02;A61P35/00;C12R1/19;C12R1/85
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

本發明公開了抗PD?L1納米抗體及其編碼序列和用途。具體地，本發明公開一類抗人PD?L1的特異性納米抗體及其VHH鏈。還公開了編碼上述納米抗體或其VHH鏈的編碼序列、相應的表達載體和宿主細胞，以及生產本發明納米抗體的方法。本發明納米抗體不僅具有高親和力和高特異性，可用于針對PD?L1的檢測及靶向治療。

技術領域

本發明涉及生物醫學或生物制藥技術領域，更具體地涉及針對PD-L1的納米抗體及其編碼序列和用途。

背景技術

程序性死亡因子1配體1(programmed death 1 ligand 1，PD-L1)又稱CD274，為B7家族成員，是PD-1的配體。PD-L1屬于I型跨膜蛋白，共290個氨基酸，包含1個IgV樣區、1個IgC樣區、1個跨膜疏水區和1個由30個氨基酸組成的胞內區。

與其他B7家族分子不同的是，PD-L1具有負向調節免疫應答的作用。研究發現，PD-L1主要表達于活化的T細胞、B細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞等，除淋巴細胞外，PD-L1也表達于其他多種組織如胸腺、心臟、胎盤等的內皮細胞，以及各類非淋巴系如黑色素瘤、肝癌、胃癌、腎細胞癌、卵巢癌、結腸癌、乳腺癌、食道癌、頭頸癌等。PD-L1在調節自身反應性T、B細胞和免疫耐受方面具有一定廣泛性，并且在外周組織T和B細胞應答起作用。PD-L1在腫瘤細胞上的高表達與癌癥患者的不良預后相關。

與PD-L1相結合的程序性死亡因子1(programmed death-1，PD-1)又稱CD279，是CD28家族成員，其胞質區含有2個酪氨酸殘基，靠近N端的1個位于免疫受體酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM)中，靠近C端的1個位于免疫受體酪氨酸轉化基序(immunoreceptor tyrosine-based switch motif，ITSM)中。PD-1主要表達在活化的T淋巴細胞、B淋巴細胞和巨噬細胞表面。在正常情況下，PD-1能夠抑制T淋巴細胞的功能，促進Treg的功能，從而抑制自身免疫應答，防止自身免疫性疾病的發生。但在腫瘤的發生中，腫瘤細胞表達的PD-L1與PD-1結合后卻能通過對淋巴細胞的抑制性作用促進腫瘤的免疫逃逸。PD-L1與PD-1的結合可導致多種生物學變化，引起免疫調控，如能夠抑制淋巴細胞的增殖和活化、抑制CD4+T細胞向Th1和Th17細胞分化、抑制炎性細胞因子的釋放等。

單克隆抗體在癌癥的檢測及生物靶向治療方面成功的應用，引起了腫瘤治療的變革。然而，傳統的單抗(150kD)分子質量過大，難穿透組織，造成腫瘤區域的有效濃度較低，治療效果不充分；傳統的抗體具有很高的免疫原性，而改造的抗體很難達到原來的親和力。此外，完全人源化的傳統抗體開發周期長，生產成本高，穩定性不夠等諸多因素限制其在臨床中的應用及普及。

納米抗體是目前最小的抗體分子，其分子量是普通抗體的1/10。納米抗體除具備單克隆抗體的抗原反應性外，還擁有一些獨特的功能特性，如分子質量小，穩定性強、可溶性好、易表達、免疫原性弱、穿透性強、靶向性強、人源化簡單，制備成本低廉等，幾乎完美克服了傳統抗體開發周期長，穩定性較低，保存條件苛刻等缺陷。

然而，目前本領域尚缺乏令人滿意的針對PD-L1的納米抗體。因此，本領域迫切需要開發新的有效針對PD-L1的特異性納米抗體。

發明內容

本發明的目的就是提供一類有效針對PD-L1的特異性納米抗體。

在本發明的第一方面，提供了一種抗PD-L1納米抗體的VHH鏈，所述VHH鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1-150中任一所示。

在另一優選例中，所述的PD-L1為人PD-L1。