[發(fā)明專利]檢測小麥是否含有簇毛麥6VS染色體臂的成套試劑與分子標記

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610156871.1
• 申請日: 2016-03-18
• 公開（公告）號: CN105586432B
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發(fā)明（設計）人: 林志珊;劉暢;葉興國;王軻;杜麗璞;李仕金;陳孝
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.檢測或輔助檢測小麥是否含有簇毛麥6VS染色體臂的成套試劑，由A-P與B-P、C-P、D-P和E-P中的至少一種組成；

所述A-P由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成；

所述B-P由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成；

所述C-P由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成；

所述D-P由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成；

所述E-P由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA組成。

2.檢測或輔助檢測小麥是否含有簇毛麥6VS染色體臂的引物對，為權利要求1中所述A-P。

3.檢測或輔助檢測小麥是否含有簇毛麥6VS染色體臂的成套試劑，由權利要求1所述成套試劑或權利要求1中所述A-P與X1組成；所述X1為F-P、G-P和H-P中的至少一種；

所述F-P由序列表中序列11和序列12所示的兩條單鏈DNA組成；

所述G-P由序列表中序列13和序列14所示的兩條單鏈DNA組成；

所述H-P由序列表中序列15和序列16所示的兩條單鏈DNA組成。

4.檢測或輔助檢測小麥是否含有簇毛麥6VS染色體臂的系統(tǒng)，為系統(tǒng)A1、系統(tǒng)A2或系統(tǒng)A3；

所述系統(tǒng)A1由權利要求1所述成套試劑與進行PCR擴增所需的試劑和/或儀器組成；

所述系統(tǒng)A2由權利要求1中所述A-P與進行PCR擴增所需的試劑和/或儀器組成；

所述系統(tǒng)A3由權利要求3所述成套試劑與進行PCR擴增所需的試劑和/或儀器組成。

5.檢測或輔助檢測小麥是否含有簇毛麥6VS染色體臂的方法，為下述R或S：

R、下述R1)或R2)：

R1)包括R11)和R12)：

R11)分別以待測小麥、參比小麥和簇毛麥的基因組DNA為模板，用5種引物對分別進行PCR擴增，得到所述5種引物對的待測小麥PCR產物、所述5種引物對的參比小麥PCR產物和所述5種引物對的簇毛麥PCR產物；所述參比小麥為不含簇毛麥6VS染色體臂的小麥，作為確定簇毛麥特異條帶的參比；

R12)將所述5種引物對的待測小麥PCR產物、所述5種引物對的參比小麥PCR產物和所述5種引物對的簇毛麥PCR產物進行電泳，根據(jù)電泳結果確定所述5種引物對的待測小麥PCR產物中是否含有簇毛麥相應引物對的特異條帶，如果所述5種引物對的待測小麥PCR產物中至少有一種引物對的待測小麥PCR產物中含有簇毛麥相應引物對的特異條帶，所述待測小麥含有或候選含有簇毛麥6VS染色體臂；如果所述5種引物對的待測小麥PCR產物中均不含有簇毛麥相應引物對的特異條帶，所述待測小麥不含或候選不含簇毛麥6VS染色體臂；

所述5種引物對為權利要求1中所述A-P、所述B-P、所述C-P、所述D-P和所述E-P；

R2)包括R21)和R22)：

R21)以待測小麥的基因組DNA為模板，用所述5種引物對分別進行PCR擴增，得到所述5種引物對的待測小麥PCR產物；

R22)檢測R21)所述5種引物對的待測小麥PCR產物的序列，如所述5種引物對的待測小麥PCR產物中含A、B、C、D和E中的至少一種，所述待測小麥含有或候選含有簇毛麥6VS染色體臂；如所述5種引物對的待測小麥PCR產物中均不含A、B、C、D和E中的任一種或任幾種，所述待測小麥不含或候選不含簇毛麥6VS染色體臂；

S、下述S1)或S2)：

S1)包括S11)和S12)：

S11)分別以待測小麥、參比小麥和簇毛麥的基因組DNA為模板，用8種引物對分別進行PCR擴增，得到所述8種引物對的待測小麥PCR產物、所述8種引物對的參比小麥PCR產物和所述8種引物對的簇毛麥PCR產物；所述參比小麥為不含簇毛麥6VS染色體臂的小麥，作為確定簇毛麥特異條帶的參比；

S12)將所述8種引物對的待測小麥PCR產物、所述8種引物對的參比小麥PCR產物和所述8種引物對的簇毛麥PCR產物進行電泳，根據(jù)電泳結果確定所述8種引物對的待測小麥PCR產物中是否含有簇毛麥相應引物對的特異條帶，如果所述8種引物對的待測小麥PCR產物中至少有一種引物對的待測小麥PCR產物中含有簇毛麥相應引物對的特異條帶，所述待測小麥含有或候選含有簇毛麥6VS染色體臂；如果所述8種引物對的待測小麥PCR產物中均不含有簇毛麥相應引物對的特異條帶，所述待測小麥不含或候選不含簇毛麥6VS染色體臂；

所述8種引物對為權利要求1中所述A-P、所述B-P、所述C-P、所述D-P和所述E-P以及權利要求3中所述F-P、所述G-P、所述H-P；

S2)包括S21)和S22)：

S21)以待測小麥的基因組DNA為模板，用所述8種引物對分別進行PCR擴增，得到所述8種引物對的待測小麥PCR產物；

S22)檢測S21)所述8種引物對的待測小麥PCR產物的序列，如所述8種引物對的待測小麥PCR產物中含有A、B、C、D、E、F、G和H中的至少一種，所述待測小麥含有或候選含有簇毛麥6VS染色體臂；如所述8種引物對的待測小麥PCR產物中均不含A、B、C、D、E、F、G和H中的任一種或任幾種，所述待測小麥不含或候選不含簇毛麥6VS染色體臂；

所述A為序列17所示的DNA分子；

所述B為序列18所示的DNA分子；

所述C為序列19所示的DNA分子；

所述D為序列20所示的DNA分子；

所述E為序列21所示的DNA分子；

所述F為序列22所示的DNA分子；

所述G為序列23所示的DNA分子；

所述H為序列24所示的DNA分子；

所述簇毛麥相應引物對的特異條帶為同一種引物對的簇毛麥PCR產物含有但所述同一種引物對的所述參比小麥的PCR產物不含有的條帶。