[發明專利]一種基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置及取樣方法

有效

• 申請號: 201610156621.8
• 申請日: 2016-03-18
• 公開（公告）號: CN105713829B
• 公開（公告）日: 2019-03-05
• 發明（設計）人: 崔勐;付強;唐君;劉歡
• 申請（專利權）人: 中國科學院長春應用化學研究所
• 主分類號: C12M1/26
• 分類號: C12M1/26
• 代理公司: 長春菁華專利商標代理事務所(普通合伙) 22210
• 代理人: 王瑩

1.基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置，其特征在于，包括線性控制器、多孔金屬富集探針和顯微鏡；

所述線性控制器由底座、支桿、夾持裝置、微分頭和固定座組成，所述支桿固定在底座上，所述夾持裝置的一端固定在支桿上，另一端夾持微分頭，夾持裝置用于調整多孔金屬富集探針與載玻片的角度，所述微分頭用于控制多孔金屬富集探針插入目標細胞的深度和時間，所述固定座與微分頭的測桿連接；

所述多孔金屬富集探針具有三維連續的多孔結構且一端為尖端，另一端固定在固定座上，多孔金屬富集探針隨微分頭的測桿沿微分頭軸線方向移動，多孔金屬富集探針的直徑為30-3000μm，尖端的直徑為1-20μm；

所述顯微鏡用于觀察待取樣組織中的細胞，待取樣組織置于顯微鏡的載玻片上。

2.根據權利要求1所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置，其特征在于，所述夾持裝置夾持微分頭的安裝套。

3.根據權利要求1所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置，其特征在于，所述多孔金屬富集探針通過以下方法制備：

步驟一、取由活潑金屬和不活潑金屬組成的合金金屬絲，所述合金金屬絲中不活潑金屬的質量百分數為20-60％，合金金屬絲的直徑為30-3000μm；

步驟二、在合金金屬絲的一端切割出直徑為1-20μm的尖端；

步驟三、采用化學腐蝕的方法腐蝕掉合金金屬絲中的活潑金屬，不活潑金屬自發形成三維連續的多孔結構，得到多孔金屬富集探針。

4.根據權利要求3所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置，其特征在于，所述步驟三采用化學腐蝕的方法腐蝕掉合金金屬絲中的活潑金屬時，同時在合金金屬絲上施加電壓，進行電化學輔助腐蝕。

5.根據權利要求3所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置，其特征在于，所述不活潑金屬為鉑、金、鈀中的一種，活潑金屬為銀、銅、鋅、鎳、錳、鋁中的一種或多種按任意比例混合；

或者，所述不活潑金屬為鈦，活潑金屬為銅、鋅、鎳、錳、鋁中的一種或多種按任意比例混合；

或者，所述不活潑金屬為銅，活潑金屬為鋅、鎳、錳、鋁中的一種或多種按任意比例混合。

6.權利要求1-5任何一項所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置的取樣方法，包括以下步驟：

步驟一、調整夾持裝置使多孔金屬富集探針與顯微鏡的載玻片成30-60度夾角；

步驟二、將待取樣組織置于顯微鏡的載玻片上，通過顯微鏡觀察待取樣組織的細胞，選取一個目標細胞；

步驟三、旋轉微分頭使多孔金屬富集探針插入目標細胞，停留至多孔金屬富集探針達到富集平衡，再次旋轉微分頭拔出多孔金屬富集探針，完成單細胞取樣。

7.根據權利要求6所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置的取樣方法，其特征在于，所述取樣方法還包括對單細胞取樣的分析過程，是將固定座從微分頭的測桿上取下，使用體積為0.1-2μL的基質溶液清洗多孔金屬富集探針的尖端后，采用MALDI-MS或者nano ESI對洗滌液進行分析。

8.根據權利要求6或7所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置的取樣方法，其特征在于，所述步驟三中，停留時間為20s以上。

9.根據權利要求8所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置的取樣方法，其特征在于，所述停留時間為20-180s。

10.根據權利要求6或7所述的基于多孔金屬富集探針的單細胞取樣裝置的取樣方法，其特征在于，在步驟三之前，還包括，在顯微鏡的視野范圍內，保證多孔金屬富集探針與顯微鏡的載玻片成30-60度夾角下，移動顯微鏡的載物臺，使多孔金屬富集探針的尖端靠近待取樣組織。