[發明專利]從漆樹木粉中提取具有抗氧化活性的黃顏木素和3,4’,7?三羥基二氫黃酮醇的方法

有效

• 申請號: 201610154914.2
• 申請日: 2016-03-18
• 公開（公告）號: CN105669627B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發明（設計）人: 王成章;陳虹霞
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林產化學工業研究所
• 主分類號: C07D311/32
• 分類號: C07D311/32;C07D311/40;A61P39/06
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技術領域

本發明涉及從漆樹木粉中提取具有抗氧化活性的黃顏木素和3,4’,7-三羥基二氫黃酮醇的方法，屬于天然藥物領域。

背景技術

漆樹是中國重要的特用經濟林，目前國內學者對漆樹栽培、生漆涂料、漆酚、漆蠟等方面進行了大量的研究。對漆樹枝椏莖材中的主要活性成分，國內研究較少。韓國學者對漆樹的化學成分和生物活性進行了詳細地研究，Park等采用多次硅膠柱層析從漆樹木材中分離得到硫黃菊素、漆黃素、黃顏木素、和3,4,3’,4’,7-五羥基黃烷。Kim等采用XAD-2D、硅膠柱和ODS 反向硅膠柱對漆樹木材的乙酸乙酯萃取部位進行分離，得到黃顏木素、沒食子酸和漆黃素。Kang等從漆樹皮中分離得到具有抗病毒作用的黃顏木素、漆黃素、硫黃菊素和紫鉚花素四種黃酮化合物。黃酮的分離絕大多數采用硅膠柱層析，由于化合物在溶解性上存在很大差異，根據相似相溶原理，采用極性較小的洗脫體系，如不同的石油醚或乙醚與乙酸乙酯比例洗脫極性由小大到的化合物，再逐漸增加洗脫體系的極性，如氯仿與甲醇的不同洗脫比例。但是一些極性與分子結構相似的化合物很難通過硅膠柱層析直接獲取，往往需要與其它的分離手段進行協同，如制備型高效液相色譜（Pre-HPLC）。 Pre-HPLC具有準備確度高，分離速度快，能夠使用反相C18色譜柱，大大地提高了多酚類化合物的分離度，但是其處理樣品量較小。中低壓分離色譜（MPLC），具有上樣量大，高效，快速等優點，是新型的分離純化技術，廣泛應用于天然產物、食品、生物醫藥等領域。

我國是漆樹的原產地，主要集中在陜西、四川、重慶、湖北、貴州、甘肅和云南七個省，在鎮雄、大方、畢節、赫章、北川、恩施等 60 多個縣建立了漆樹產業化種植基地，種植面積達100萬hm2，栽種漆樹達150,000 萬株。但是目前漆樹的產業主要集中在天然生漆涂料的生產及開發，在漆籽的利用方面也比較薄弱，另外在漆樹生長、利用過程中，大量的枝椏莖材未得到利用，為了擴大漆樹產業的規?；由炱針滟Y源的產業鏈，因此開展漆樹多酚中具有抗氧化活性化合物的提取和制備研究，對于漆樹資源的開發利用具有指導意義。

發明內容

為實現上述目的，發明了從漆樹木粉中提取具有抗氧化活性的黃顏木素和3,4’,7-三羥基二氫黃酮醇的方法，其特征在于由以下步驟組成：

第一步

將漆樹木粉，干燥去渣，按質量體積比為1:10~1:30(g:mL)，加入質量分數為50~95%的乙醇或甲醇水溶液，減壓回流提取2~3次，每次1~3h，過濾，濾液合并，于40~60℃下減壓蒸發除去溶劑，得到含水粗提液；

第二步

粗提液按質量比1:3~1:10(g:mL)加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取1~5次，分離，在40~60℃下減壓蒸發除去溶劑，得到石油醚萃取物；水層繼續用乙酸乙酯萃取1~5次，分離，在40~60℃下減壓蒸發除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物;

第三步

將乙酸乙酯萃取物與硅膠填料按質量比1:15-50吸附，柱長50-150 cm，柱直徑4-20 cm，采用不同比例石油醚與乙酸乙酯進行洗脫，收集抗氧化活性較高的石油醚:乙酸乙酯體積比為7:3-3:7(v:v)的部位，真空濃縮，回收溶劑，得到富含黃顏木素和3,4’,7-三羥基二氫黃酮醇的提取物；

第四步

將富含黃顏木素和3,4’,7-三羥基二氫黃酮醇的提取物與中低壓色譜填料按質量比1:15-50吸附，中壓柱柱長20-80 cm，柱直徑2-8 cm，采用不同比例的洗脫劑進行洗脫，柱壓為0.5-10 MPa, 檢測波長220-280 nm，流速3-50 mL/min，分別收集黃顏木素和3,4’,7-三羥基二氫黃酮醇部位，真空濃縮，回收溶劑，得到黃顏木素和3,4’,7-三羥基二氫黃酮醇樣品，將黃顏木素和3,4’,7-三羥基二氫黃酮醇進行HPLC分析，含量為95%以上；

第五步