[發(fā)明專利]一種奇異變形桿菌-金黃色葡萄球菌-銅綠假單胞菌吸附聯(lián)合疫苗的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610154756.0
• 申請(qǐng)日: 2016-03-18
• 公開（公告）號(hào): CN105709218A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周荔葆;楊文腰;王瀛;修雪亮;王琦;張建;戴澤文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧成大生物股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/085
• 分類號(hào): A61K39/085;A61K39/104;A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽(yáng)亞泰專利商標(biāo)代理有限公司 21107
• 代理人: 韓輝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疫苗的制備方法，特別是涉及一種奇異變形桿菌-金黃色葡萄球菌-銅綠假單胞菌吸附聯(lián)合疫苗（PSP吸附聯(lián)合疫苗）制備方法，尤其是涉及用于預(yù)防、治療，條件致病菌燒傷、術(shù)前及術(shù)后等感染的吸附聯(lián)合疫苗制備方法，包括奇異變形桿菌胞膜可溶性抗原、金黃色葡萄球菌胞質(zhì)抗原、金黃色葡萄球菌類毒素、銅綠假單胞菌類毒素及氫氧化鋁凝膠吸附聯(lián)合疫苗的制備方法，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

近些年來，由于國(guó)內(nèi)抗生素亂用現(xiàn)象日趨嚴(yán)重，奇異變形桿菌、金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌等目前已成為嚴(yán)重的醫(yī)院感染病原菌，同時(shí)也是燒傷患者創(chuàng)面感染的重要致病菌。當(dāng)患者免疫功能不良時(shí)常引起重癥奇異變形桿菌、金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌感染，尤其是囊性纖維變性、嚴(yán)重?zé)齻⑼饪苿?chuàng)傷及或手術(shù)移植、癌癥、泌尿道疾患等患者深受其害。感染引起不同的疾病，從輕微的皮膚感染至菌血癥、骨髓炎、內(nèi)膜炎、毒膿癥等嚴(yán)重危害廣大群眾的身體健康。

國(guó)內(nèi)外目前還沒有報(bào)道關(guān)于奇異變形桿菌疫苗，而對(duì)于綠膿桿菌疫苗研究也不是很多，目前對(duì)銅綠假單胞菌候選疫苗的適當(dāng)成分的研究集中于假單胞菌菌體及外膜表達(dá)成分，例如甲醛滅活菌體、外毒素A（PEA）、彈性蛋白酶及堿性蛋白酶、纖毛、殺白細(xì)胞素等，通過資料收集，主要包括Pseudostat^TM疫苗、銅綠假單胞菌-甘露糖敏感血凝(PA-MSHA)菌毛株疫苗和IC43疫苗。大量資料表明金黃色葡萄球菌候選疫苗主要包括莢膜多糖（CP5、CP8和CP336等）和毒素

（α-Hemolysin、PVL、TSST-1等），葡糖胺（PNAG、PNSG）和表面蛋白（IsdA、IsdB、SdrDandSdrE），DNA疫苗FnBPA-CifA和肽聚糖（Peptidoglycan，PGN）等。面對(duì)金黃色葡萄球菌感染的復(fù)雜性，金黃色葡萄球菌含有多種致病性因子，而這些因子在細(xì)菌生長(zhǎng)不同階段依序表達(dá)。近些年來，國(guó)內(nèi)外相關(guān)疫苗公司積極開展金黃色葡萄球菌候選疫苗方面的研究以及臨床試驗(yàn)，然而大多數(shù)金黃色葡萄球菌疫苗候選疫苗臨床研究沒有達(dá)到臨床預(yù)期目標(biāo)。而且菌株致病因子很多，且含量較低，而且全菌體疫苗、減毒雖具有一定免疫原性，但是副反應(yīng)較強(qiáng)，直接從全菌體中分離純化具有保護(hù)性的抗原組分工藝難度較大，方法復(fù)雜，回收率低，不利于疫苗的產(chǎn)業(yè)化制備，利用基因重組技術(shù)獲取相關(guān)活性組分，其活性組分天然結(jié)構(gòu)不完整，免疫原性不強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，給出一種新型制備奇異變形桿菌-金黃色葡萄球菌-銅綠假單胞菌吸附聯(lián)合疫苗（PSP吸附聯(lián)合疫苗）的方法。本發(fā)明采用奇異變形桿菌、金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌進(jìn)行通過大規(guī)模發(fā)酵，采用酶法消化、離心、超濾、乙醇沉淀等獲取奇異變形桿菌胞膜可溶性組分，采用離心、機(jī)械破碎、等電點(diǎn)沉淀、酶解等獲取金黃色葡萄球菌胞質(zhì)可溶性組分，采用離心、預(yù)過濾、超濾、脫毒等獲取金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌類毒素活性組分，然后將四種原液、佐劑等按照一定比例進(jìn)行配伍、混合形成吸附聯(lián)合疫苗。該疫苗包括6株奇異變形桿菌胞膜可溶性抗原、金黃色葡萄球菌胞質(zhì)抗原、金黃色葡萄球菌類毒素和銅綠假單胞菌類毒素，上述9種抗原混勻后吸附于氫氧化鋁凝膠（Al（OH）₃）。該法工藝簡(jiǎn)單，所獲取活性抗原成分種類多，覆蓋范圍廣，能夠有效的提高免疫原性和保護(hù)性。

本發(fā)明給出的技術(shù)方案是：一種奇異變形桿菌-金黃色葡萄球菌-銅綠假單胞菌吸附聯(lián)合疫苗（PSP吸附聯(lián)合疫苗）的制備方法，其特征在于有以下步驟：

（1）奇異變形桿菌胞膜可溶性抗原原液制備；

（2）金黃色葡萄球菌胞質(zhì)抗原原液制備；

（3）金黃色葡萄球菌類毒素原液制備；

（4）銅綠假單胞菌類毒素原液制備；

（5）奇異變形桿菌6價(jià)抗原混合液制備；

（6）奇異變形桿菌-金黃色葡萄球菌-銅綠假單胞菌吸附聯(lián)合疫苗（PSP吸附聯(lián)合疫苗）制備。