[發明專利]一種農桿菌介導的粳稻快速遺傳轉化方法

在審

• 申請號: 201610154281.5
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105755037A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 黃培勁;安保光;李亞梅;陳思蘭;歐陽超
• 申請（專利權）人: 海南波蓮水稻基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明屬于植物的組織培養和轉基因技術的交叉領域，具體涉及一種農桿菌介導的粳稻快速遺傳轉化方法。

背景技術

水稻(OryzasativaL.)是亞洲地區的主要糧食作物，同時也是單子葉植物基礎研究的模式植物。隨著世界人口的不斷增長和人們生活水平的提高，對水稻產量及品質提出了更高的要求，僅依靠傳統的育種技術已經很難滿足需求，通過現代生物技術與傳統育種技術相結合來提高水稻的產量和質量是今后的主要發展趨勢。作為現代生物技術重要技術之一的植物轉基因工程技術，是根據育種目標將人工分離和修飾過的優良目的基因，通過遺傳轉化導入受體植物基因組中，使外源基因在受體植物中表達，從而快速、直接獲得可遺傳的優良性狀的品種。在當今農業生產中，與常規育種相比，轉基因技術具有不可比擬的優勢：1、拓寬可利用的基因資源，創造新種質資源；2、可對植物性狀進行定向定點變異和選擇；3、為培育高產、優質、高抗優良品種提供新途徑(李文鳳，季靜(2010)提高轉基因植物標記基因安全性策略的研究進展.中國農業科學09:1761-70)。

植物基因轉化方法可分為生物學、化學和物理學方法三大類。生物學方法有農桿菌介導轉化法、花粉管通道法、病毒介導法等；物理學方法包括基因槍法、顯微注射法和電激穿孔法等；化學方法包括聚乙二醇法、脂質體法等。在上述多種方法中，最常用的方法是農桿菌介導轉化法(郜旭芳(2010)植物轉基因技術的研究和應用.科協論壇4:70-71)。農桿菌介導轉化法曾僅限于雙子葉植物，多數單子葉植物由于農桿菌侵染后無法產生酚類物質或含量過低，使得外源基因轉入單子葉植物受體細胞受到限制(VasilIK(2008)Ahistoryofplantbiotechnology:fromthecelltheoryofSchldidcnandSchwanntobiotechcrops.PlantCellRep27:1423-1440)。經研究者改進，該轉化方法日趨成熟(NishimuraA,AichiI,MatsuokaM(2007)AprotocolforAgrobacterium-mediatedtransformationinrice.NatProtocols1(6):2796-2802；HieiY,KomariT(2008)Agrobacterium-mediatedtransformationofriceusingimmatureembryosorcalliinducedfrommatureseed.NatProtoc3:824-834；ZhangW-J,DeweyRE,BossW,PhillippyBQ,QuR(2013)EnhancedAgrobacterium-mediatedtransformationefficienciesinmonocotcellsisassociatedwithattenuateddefenseresponses.Plantmolecularbiology81(3):273-286)，現已被廣泛利用于植物轉基因，與其他遺傳轉化方法相比，農桿菌介導法因為具有轉化效率高、插入片段穩定性好、可轉移外源片段較大、外源基因拷貝數低且成本低、操作簡單等優點，可作為功能基因驗證、突變體庫構建和轉基因育種等的有效途徑，是目前應用最廣泛、轉化機理研究最清楚的遺傳轉化方法(李衛,郭光泌,鄭國鎘(2000)根癌農桿菌介導遺傳轉化研究的若干新進展.科學通報.45(8):798-807.)。