[發明專利]一種抗體酸性峰的純化方法

有效

• 申請號: 201610154004.4
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105777896B
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 鄔君;馬旭通;林小鵲;楊彬;孫文正;蘇彥景
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K16/24;C07K1/18;C07K1/16
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• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種抗體酸性峰的純化方法，具體的，在2～8℃下，包含以下步驟：(1)使用MEP HyperCel填料，使用電導率由小變大的洗脫液洗脫，收集目標峰洗脫液，其中洗脫液中含有5～10mmol/L的苯丁酸鈉；(2)將步驟(1)中的目標峰洗脫液進行弱陽離子層析，使用丁酸鹽作為緩沖鹽洗脫目標峰。通過上述方法進行純化后，能加強對抗體酸性峰的去除，可有效的將酸性峰控制在11％?14％范圍內。

技術領域

本發明涉及抗體純化領域，具體涉及一種抗體酸性峰純化的方法。

背景技術

單克隆抗體在表達過程中，經過多種翻譯修飾之后，會導致電荷異質性，體現在等電點不同，產生一系列不同等電點的抗體。經過高分辨率的離子交換柱分析，出現連續性的峰，而非單一的峰。電荷異質性影響到單克隆抗體的穩定性及生物學活性，因此在生產中，電荷異質性成為關鍵質量屬性，需要嚴格控制。

由于電荷異質性差異非常小，很難通過一步層析就可以將抗體酸性峰降到可以接受的范圍內。需要極高分辨率的離子交換填料，再配合其他的層析手段，比如親和層析柱Protein A等。雖然Protein A層析效果對單克隆抗體的其他雜質如HCP、DNA、輕鏈等去除效果最佳，但對酸性峰的去除效果不如高分辨率的離子交換填料。配合高分辨率的離子交換填料GE公司的SP Sepharose High Performance，效果并不如意，且成本是非常昂貴的，GE公司的ProteinA通常需要十幾萬一升，使用壽命較短，另外，親和填料含有蛋白A成分，使用后蛋白A會脫落引入新的雜質，需要建立檢測蛋白A的方法和去除工藝。使用復合填料利用常規的去除方法，由于是滿載上樣，粒徑較大，分辨率本身就不高，去除酸性峰的效果并不理想，給下游雜質的去除整加壓力。

另外，使用其他填料的組合，如使用陽離子交換和陰離子交換，在常規方法去除抗體酸性峰的效果也不是很理想。目前，在控制抗體酸性峰的含量在醫藥純化領域是一個普遍的難題。

發明內容

本發明根據上述技術背景的不足，本文選用pall公司的MEP填料和弱陽離子作為純化手段，有效降低酸性峰的含量，減少后續純化的壓力。

具體的，本發明提供了一套可適于抗體酸性峰的純化工藝，在2～8℃下，包含以下步驟：

(1)使用Pall公司的MEP HyperCel填料，使用電導率由小變大的洗脫液洗脫，收集目標峰洗脫液，其中洗脫液中含有5～10mmol/L的苯丁酸鈉；

(2)將步驟(1)中所述目標峰洗脫液進行弱陽離子層析，使用丁酸鹽作為緩沖鹽洗脫目標峰。

在一些實施方案中，弱陽離子層析的填料為CM Sephadex C-25、TOYOPEARL CM-650(S)、Uni CM-30S。

在弱陽離子的層析過程中，進行洗脫時的緩沖液其丁酸鹽的濃度常為150～250mmol/L。

在另一些實施方案中，純化工藝包含以下步驟：

(1)使用Pall公司的MEP HyperCel填料，上樣平衡后，先使用pH6.5的30mmol/L檸檬酸鹽緩沖液洗脫，再使用pH7.0的50mmol/L檸檬酸鹽緩沖液洗脫，收集目標峰洗脫液，其中檸檬酸鹽緩沖液中均含有5～10mmol/L的苯丁酸鈉；

(2)將步驟(1)中所述目標峰洗脫液進行弱陽離子層析，平衡后使用pH7.0的200mmol/L丁酸鹽緩沖液洗脫目標峰。

在一些實施方案中，丁酸鹽為丁酸鈉、丁酸鈣、吲哚丁酸鉀。

本發明的一些實施方案中，抗體是TNFα抗體或其抗原結合部分，如英夫利昔單抗(infliximab)、阿達木單抗(adalimumab)、Golimumab都是TNFα類抗體。

本發明有益效果在于：