[發明專利]苯丁酸鈉在抗體酸性峰純化中的應用

在審

• 申請號: 201610153955.X
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105777895A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 鄔君;馬旭通;林小鵲;楊彬;孫文正;蘇彥景
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K16/24;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及抗體純化領域，具體涉及一種抗體酸性峰純化的方法。

背景技術

酸性峰是單克隆抗體的電荷異質性相關雜質。電荷異質性的差異主要來源于翻譯后修飾，具體原因包 括脫酰胺、末端賴氨酸的缺失等。酸性峰是普遍存在的現象，純化一般用高分辨率的陽離子填料。但使用 陽離子填料的話，需要調節樣品的電導及pH，勢必會稀釋樣品，延長上樣時間。另外調節pH一般會引起 共沉淀現象，降低回收率。

MEP-HyperCel為Pall公司的一款復合填料，具有疏水和離子交換兩種機制。料液可以不經調節電導 和pH，高鹽直接上樣。與填料結合后，可以通過改變pH、電導等來洗脫抗體與雜質。利用此方法，經本 發明人實踐得出，只能使酸性峰比例降至27-32％左右。為了減少下游純化壓力，因此需要進一步降低酸 性峰的比例。

發明內容

本發明根據上述技術背景的不足，提供了一套可適于抗體酸性峰的純化工藝，該工藝方法具有簡單易 行，成本較小，能有效降低抗體中酸性峰的比例。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了苯丁酸鈉在抗體酸性峰純化中的應用。

在本發明的一些實施方案中，苯丁酸鈉在含抗體的溶液中的濃度為5～10mmol/L。

在本發明的一些實施方案中，在抗體與色譜基質接觸的洗脫溶劑中加入苯丁酸鈉。

在本發明的一些實施方案中，苯丁酸鈉的濃度為5～10mmol/L。

在本發明的一些實施方案中，2～8℃溫度下，包含使用MEP-HyperCel填料進行電導率由小變大的緩沖 液洗脫，其中緩沖液中含有濃度為5～10mmol/L苯丁酸鈉。

在本發明的一些實施方案中，電導率由小變大的緩沖液洗脫為兩步洗脫。

在本發明的另一些實施方案中，兩步洗脫條件為：

(1)使用pH為6.3～6.5，含30mmol/L檸檬酸鹽、5～10mmol/L苯丁酸鈉的緩沖液洗脫；

(2)使用pH為7.0～7.2，含50mmol/L檸檬酸鹽、5～10mmol/L苯丁酸鈉的緩沖液洗脫。

在本發明的一些實施方案中，抗體是TNFα抗體或其抗原結合部分，如英夫利昔單抗(infliximab)、阿 達木單抗(adalimumab)、Golimumab都是TNFα類抗體。

定義與解釋

術語“色譜”是指由于在一定流動相影響下，混合物中的各溶質通過固相介質的速率不同，或者在結 合和洗脫過程中從混合物中的其他溶質中分離混合物中有關溶質的方法。常見色譜基質有離子交換色譜基 質和疏水作用色譜基質等，具有上述混合模式作用的色譜基質如本發明使用的Pall公司的MEPHyperCel 填料基質也屬于本領域技術人員的公知常識。

術語“抗體”意指由四個多肽鏈即兩個重鏈(H)和兩個輕鏈(L)通過二硫鍵相互連接構成的免疫球蛋白 分子。

本發明有益效果在于：

本發明通過加入苯丁酸鈉，可以降低抗體酸性峰的比例。同時樣品可以直接上樣，可以縮短整個純化 時間，減少操作步驟，減少抗體的損失。該純化工藝具有對酸性峰去除效果好、抗體的回收率高等特點， 整個工藝操作簡單易行，重復性好，純化效果理想。

具體實施方式

以下所述的是本發明的優選實施方式，本發明所保護的不限于以下優選實施方式。應當指出，對于本 領域的技術人員來說在此發明創造構思的基礎上，做出的若干變形和改進，都屬于本發明的保護范圍。

實施方案中所用的原料及耗材均可以通過商業途徑或公知途徑自主獲得。實施方案中用到的層析系統 為GE公司的AKTApurifer，色譜柱為PallLRC15X080-200V01柱。實施方案中用到的色譜基質 MEP-HyperCel為Pall公司的一款復合填料，具有疏水和離子交換兩種機制，填料由4巰基乙基吡啶偶聯 剛性纖維素組成。SPsepharoseFF填料為陽離子交換樹脂，填料由磺酸基團偶聯6％的瓊脂糖凝膠組 成。