[發明專利]一種ALDH2基因c.1510位點多態性檢測的引物和試劑盒

在審

• 申請號: 201610152579.2
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105624315A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 王軍;韓淑毅;張慧林;朱鵬沖;徐祎慧;王敏;張孝乾;劉沛;周婷;劉妍妍
• 申請（專利權）人: 汪運山
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 曹麗

技術領域

本發明涉及一種ALDH2基因c.1510位點多態性檢測的引物和試劑盒。

背景技術

心絞痛是由于冠狀動脈粥樣硬化狹窄導致冠狀動脈供血不足產生，臨床上使用舌 下含服硝酸甘油治療，硝酸甘油通過釋放一氧化氮(NO)，NO與內皮舒張因子相同，激活鳥苷 酸環化酶，使平滑肌和其他組織內的環鳥苷酸(CGMP)增多，導致肌球蛋白輕鏈去鱗酸化，調 節平滑肌收縮狀態，引起血管擴張從而緩解心絞痛。一般舌下含服硝酸甘油15分鐘內見效， 若不能緩解需及時入院治療。實驗發現乙醛脫氫酶2(aldehydedehydrogenase2，ALDH2) 是硝酸甘油起效的關鍵因素，硝酸甘油的代謝需要ALDH2基因編碼的酶，ALDH2基因具有遺 傳多態性，其中與亞洲人群最為密切的是ALDH2基因的c.1510位核苷酸存在G/A多態性。其 遺傳變異型使硝酸甘油代謝速率大大降低，野生型的酶活性是變異型酶活性的10倍。從而 無法產生一氧化氮，難以發揮藥效或藥效降低。除此之外，ALDH2還是酒精代謝中的關鍵酶 之一，飲酒后，酒精分別通過乙醇脫氫酶(ADH)和乙醛脫氫酶(ALDH)代謝成二氧化碳和水排 出體外。ALDH2基因突變型會使酒精代謝受阻，導致乙醛在體內的堆積。乙醛在人體血液的 積累，會造成對細胞膜脂質的過氧化，發生酒精中毒、酒精依賴、肝病、食管癌、咽喉癌等發 生率提高。

因此，ALDH2基因上的SNP位點G>A的基因多態性對治療心絞痛影響重大，通過對 ALDH2基因上G>ASNP點基因型的檢測來輔助臨床診斷，為臨床醫生選擇藥物提供參考。同 時對過度飲酒嗜酒的人有一定的指導意義，以減少疾病的發生風險。

目前，檢測基因位點多態性的技術手段有很多，但是大多數均停留在實驗室水平， 還不能真正應用的醫療機構的日常檢測中，以下介紹目前存在的檢測技術：

(1)單鏈構象多態性技術(PCR-SSCP)

利用點突變或SNP可以對短的DNA單鏈構象造成影響，從而導致電泳速度的不同來 進行檢測。特點是可以進行特定區域突變的篩查，但需要跑PAGE膠，較為繁瑣，并有一定的 漏檢率。

(2)高分辨率融解曲線分析(HRM)

這是近兩年發展起來的新技術，原理簡便，不需要對反應條件和體系進行特別的 優化，容易實現，可進行突變的篩查，但需要特定儀器和試劑的支持。并且只能對片段內突 變點進行檢測，不能確定檢測突變點的具體位置，容易造成假陽性結果。

(3)Taqman探針法(定量PCR)

適合已知SNP位點、位點數量少、通量高的檢測。但是探針合成費用價格昂貴，不能 同時發現未知SNP位點，并且容易造成假陽性結果。

(4)變性高效液相色譜(DHPLC)

對于特定位點的突變檢測，需要摸索各種條件，穩定性較差，影響因素太多，所以 不容易做好。

(5)限制性內切酶酶切法

根據突變或SNP位點選擇合適的內切酶對PCR產物進行酶切，然后電泳鑒定。該方 法穩定可靠，但要注意酶切效率完全，而且不是所有的突變或SNP位點都有酶可以選擇，容 易造成污染。

(6)芯片技術

與傳統的儀器檢測方法相比具有高通量、微型化、自動化、防污染等特點，僅適用 于全基因組SNP掃描，不適宜單個基因的SNP位點檢測，精度低，價格昂貴。

目前國內上海百傲科技有限公司的ALDH2基因多態性檢測試劑盒采用的是基因芯 片方法已獲得認證。

(7)位點特異性PCR引物(ARMS)

利用PCR引物的3’端末位堿基必須與其模板DNA互補才能有效擴增的原理，設計等 位基因特異性PCR擴增引物，在嚴格的條件下，只有在引物3’堿基與模板配對時才能出現 PCR擴增帶，從而檢測出突變。利用Taqman探針在實時熒光定量PCR平臺上實現對樣品DNA中 突變的檢測，具有極高的特異性和敏感度。

(8)直接測序法

SNP分析的金標準，由于基因序列分析法檢測的是易突變區的完整序列，因此可以 檢測未知突變位點。但測序實驗操作較為復雜、實驗周期較長、電泳容易造成實驗室污染。

發明內容

本發明的目的就是為了解決上述問題，提供一種ALDH2基因c.1510位點多態性檢 測的引物和試劑盒。