[發(fā)明專利]冠心病和冠心病合并糖尿病檢測(cè)靶標(biāo)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610151586.0
• 申請(qǐng)日: 2016-03-16
• 公開（公告）號(hào): CN105648094B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宮蕊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 宮蕊
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;G01N33/68;A61K48/00;A61K45/00;A61P9/10;A61P3/10
• 代理公司: 北京中譽(yù)威圣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11279
• 代理人: 孟祥斌;朱萍

本發(fā)明涉及冠心病和冠心病合并糖尿病檢測(cè)靶標(biāo)及其應(yīng)用。發(fā)明基于對(duì)單純冠心病、冠心病合并糖尿病患者及健康人外周血的高通量測(cè)序及分析，挑選出候選基因FRG1，進(jìn)一步，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了FRG1基因與冠心病和冠心病合并糖尿病具有很好的相關(guān)性，并且基因FRG1還可以用來(lái)區(qū)分這兩種疾病，為臨床的防治提供參考，此外，發(fā)明設(shè)計(jì)了針對(duì)FRG1的高效干擾RNA，為后續(xù)治療制劑的研制提供基礎(chǔ)。本發(fā)明提供的冠心病和冠心病合并糖尿病輔助診斷靶標(biāo)具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及冠心病和冠心病合并糖尿病檢測(cè)靶標(biāo)及其應(yīng)用，更具體的涉及冠心病和冠心病合并糖尿病檢測(cè)靶標(biāo)FRG1及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

冠心病(coronary heart disease，CHD)即冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的簡(jiǎn)稱，指冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化引起的管腔狹窄或閉塞，導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病，也稱為缺血性心臟病。我國(guó)每年約有幾百萬(wàn)人死于心血管病，在這之中尤其以冠心病對(duì)人民健康的威脅最大。關(guān)于動(dòng)脈粥樣硬化現(xiàn)在己經(jīng)確立了多種危險(xiǎn)因素，其中以糖尿病特別突出，糖尿病患者與非糖尿病人群相比冠心病發(fā)病率常高出數(shù)倍，病情進(jìn)展十分迅速，約75％糖尿病患者最后死于冠心病。隨著糖尿病的患病率的增加，其患病人群中的青壯年人逐年增長(zhǎng)，對(duì)社會(huì)和家庭的危害更加嚴(yán)重。雖然多年來(lái)對(duì)關(guān)于動(dòng)脈粥樣硬化的基礎(chǔ)和臨床研究的取得了很大的進(jìn)步，發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與遺傳、炎癥、免疫、代謝等緊密相關(guān)，但是其具體機(jī)制仍未完全闡明，此外，冠心病合并糖尿病的發(fā)病機(jī)制研究更少，目前臨床迫切需要尋找冠心病、冠心病合并糖尿病的分子診斷標(biāo)記，進(jìn)行早預(yù)防、早治療，尤其是對(duì)冠心病合并糖尿病患者，早期診斷將有效提高患者生存率。

為解決目前冠心病和冠心病合并糖尿病早期分子診斷標(biāo)記稀缺的問(wèn)題，發(fā)明人對(duì)2例單純冠心病患者，6例冠心病合并糖尿病患者及10例健康人對(duì)照外周血樣本進(jìn)行高通量測(cè)序，結(jié)合生物信息學(xué)方法分析進(jìn)行靶點(diǎn)基因的篩選，挑選出候選基因FRG1，進(jìn)一步，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了FRG1基因與冠心病和冠心病合并糖尿病具有很好的相關(guān)性，并且可以用來(lái)區(qū)分這兩種疾病，為臨床的防治提供參考，進(jìn)一步，發(fā)明設(shè)計(jì)了針對(duì)FRG1的高效干擾RNA，為后續(xù)治療制劑的研制提供基礎(chǔ)。本發(fā)明提供的冠心病和冠心病合并糖尿病輔助診斷靶標(biāo)具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供檢測(cè)FRG1基因和/或其表達(dá)蛋白的制劑在制備冠心病和/或冠心病合并糖尿病診斷制劑中的應(yīng)用。

進(jìn)一步，冠心病和/或冠心病合并糖尿病的診斷制劑包括用熒光定量PCR方法、基因芯片方法檢測(cè)外周血中FRG1基因和/或FRG1蛋白的表達(dá)。

熒光定量PCR法是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。熒光定量PCR的出現(xiàn)，極大地簡(jiǎn)化了定量檢測(cè)的過(guò)程，而且真正實(shí)現(xiàn)了絕對(duì)定量。多種檢測(cè)系統(tǒng)的出現(xiàn)，使實(shí)驗(yàn)的選擇性更強(qiáng)。自動(dòng)化操作提高了工作效率，反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。

基因芯片又稱為DNA微陣列(DNA microarray)，可分為三種主要類型：1)固定在聚合物基片(尼龍膜，硝酸纖維膜等)表面上的核酸探針或cDNA片段，通常用同位素標(biāo)記的靶基因與其雜交，通過(guò)放射顯影技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。2)用點(diǎn)樣法固定在玻璃板上的DNA探針陣列，通過(guò)與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進(jìn)行檢測(cè)。3)在玻璃等硬質(zhì)表面上直接合成的寡核苷酸探針陣列，與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進(jìn)行檢測(cè)。基因芯片作為一種先進(jìn)的、大規(guī)模、高通量檢測(cè)技術(shù)，應(yīng)用于疾病的診斷，其優(yōu)點(diǎn)有以下幾個(gè)方面：一是高度的靈敏性和準(zhǔn)確性；二是快速簡(jiǎn)便；三是可同時(shí)檢測(cè)多種疾病。

用于熒光定量PCR方法檢測(cè)冠心病和/或冠心病合并糖尿病中FRG1基因的產(chǎn)品含有一對(duì)特異性擴(kuò)增FRG1基因的引物；所述的基因芯片包括與FRG1基因的核酸序列雜交的探針。