[發(fā)明專利]一種固相萃取葛根中黃酮類化合物的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610151227.5
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105669782A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁春華;王志慧;林大偉
• 申請（專利權(quán)）人: 袁春華
• 主分類號: C07G99/00
• 分類號: C07G99/00;B01J20/26;B01J20/30
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種固相萃取葛根中黃酮類化合物的方法，屬于黃酮類化合物領(lǐng)域。

背景技術(shù)

黃酮類化合物是一類多酚類抗氧化劑，是葛根、補(bǔ)骨脂、黃芩、銀杏、沙棘、槐米等臨床常用中藥材的主要活性成分。該類化合物不僅數(shù)量眾多，而且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有許多重要的生理活性，如抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、抗過敏、抗糖尿病并發(fā)癥等，特別是異黃酮類化合物作為天然雌激素。

天然黃酮類化合物雖然生理活性豐富并且廣泛存在于自然界，但因其溶解性差、生物利用度不高等缺點(diǎn)而限制了它們的臨床應(yīng)用。因此對自然界含量較高的天然黃酮進(jìn)行半合成的結(jié)構(gòu)修飾，使之達(dá)到成藥要求，是合理開發(fā)利用該類化合物的一條重要途徑，并且該方法具有原料來源豐富、化學(xué)合成步驟少、生產(chǎn)成本相對較低等優(yōu)勢。

固相萃取技術(shù)是近年來興起的一項(xiàng)樣品前處理技術(shù)，由于固相萃取中的固定相種類非常豐富，而流動相可以在各種不同的有機(jī)溶劑中選擇，通過選擇不同的固定相，與不同的流動相進(jìn)行多種搭配組合，從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)組分與雜質(zhì)之間的高選擇性，再通過一定的優(yōu)化試驗(yàn)，可以得到凈化效果好、回收率高、重現(xiàn)性好的條件。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題：針對黃酮類化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有許多重要的生理活性，傳統(tǒng)分離萃取材料選擇性較差，經(jīng)常需要多次溶劑萃取和柱層析來得到純度高的活性成分，分離效率和收率較低，而且會造成環(huán)境污染的問題，提供了一種固相萃取葛根中黃酮類化合物的方法，本發(fā)明以黃岑素或黃岑苷為黃酮類模板，以甲基丙烯酸為功能單體，以N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑制備出分子印跡固相萃取劑，利用分子印跡固相萃取劑在葛根粉酶解液中吸附，再淋洗回收葛根黃酮化合物，對其濃縮、干燥、粉碎即可，本發(fā)明得到的葛根黃酮類提取物純度高，分離回收率高，提取過程中不需要大量溶劑，對環(huán)境友好，而且有效成分損失少、成本低、效率快、副產(chǎn)物少。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

（1）精確稱取1～2mmol黃岑素或黃岑苷和5～10mmol甲基丙烯酸裝入100mL帶有攪拌器、溫度計(jì)和通氣口的三口燒瓶中，再加入50～60mL無水乙醇，啟動攪拌器攪拌直至反應(yīng)物完全溶解，常溫下密封靜置使黃酮類模板和功能單體反應(yīng)過夜；

（2）反應(yīng)結(jié)束后在攪拌狀態(tài)下繼續(xù)加入4～5gN，N’-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)劑和20～25mg偶氮二異庚腈引發(fā)劑，經(jīng)通氣口向燒瓶中通入氮?dú)庵脫Q出瓶中空氣后密閉瓶口，將燒瓶移入水浴鍋加熱升溫至45～60℃，保溫反應(yīng)20～24h產(chǎn)生淡黃色沉淀，過濾后干燥得分子印跡聚合物；

（3）將上述得到分子印跡聚合物研磨后過100目標(biāo)準(zhǔn)篩，將過篩后的粉末放入其體積3～5倍由0.5mol/L甲醇和0.3mol/L醋酸按體積比為10:1組成的混合液中沉降至上層液澄清為止，過濾后干燥即得分子印跡固相萃取劑，備用；

（4）稱取1～2kg葛根放入藥材粉碎機(jī)中粉碎并過100目標(biāo)準(zhǔn)篩，將500～600g過篩后的葛根粉裝入搪瓷酶解罐中，再加入1～2L蒸餾水，用攪拌棒攪拌均勻后，按反應(yīng)底物總質(zhì)量6～8%加入復(fù)合酶制劑后，用濃度為0.5mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至4～5，放入恒溫箱，在40～45℃下酶解6～8h；

（5）酶解結(jié)束后，過濾去除濾渣得到酶解液，量取400～500mL酶解液裝入1L燒杯中，按液固比為3:1向酶解液中加入備用的分子印跡固相萃取劑，再將燒杯放置超聲振蕩儀中，在頻率為25～35kHz和功率為100～200W的條件下超聲固相萃取50～60min；

（6）萃取結(jié)束后過濾分離得到固相萃取劑，將其裝入直徑為3cm，高為20cm的圓柱形玻璃柱中，用1～2L無水乙醇分3～5次對玻璃柱中的固相萃取劑進(jìn)行淋洗并從玻璃柱下方收集淋洗液，將淋洗液合并后裝入蒸餾裝置中，蒸餾回收無水乙醇后得到葛根黃酮化合物濃縮液，最后經(jīng)真空凍干后粉碎并過200目標(biāo)準(zhǔn)篩，包裝，即得葛根黃酮類提取物。

所述的復(fù)合酶制劑是由纖維素酶和果膠酶按質(zhì)量比為2:1復(fù)配制得。

本發(fā)明的應(yīng)用的方法：本發(fā)明制得的葛根黃酮類提取物的提取率達(dá)到3.15～6.48%，純度為53.6～62.8%，分離速度快，有效成分損失少、成本低，可廣泛應(yīng)用在化妝品、醫(yī)藥、食品等工業(yè)中，目前黃酮類化合物在食品工業(yè)中，可以作為天然甜味劑、天然色素、保健食品等；應(yīng)用在藥物中可具有抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗心腦血管疾病、抗癌抗腫瘤等作用。

本發(fā)明的有益效果是：