[發(fā)明專利]一種凝乳酶的應(yīng)用及其制備方法

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• 申請日: 2016-03-16
• 公開（公告）號: CN107201353A
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李紅玉;崔磊;李洋
• 申請（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號: C12N9/56
• 分類號: C12N9/56;A61K38/48;A61P1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種凝乳酶YS-1的應(yīng)用及其制備方法。該凝乳酶YS-1是由枯草芽孢桿菌YB-3菌株(Bacillus subtilis YB-3)分泌而成，該菌已于2009年4月17日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國.武漢.武漢大學(xué)，郵編：430072，電話：[phone]，傳真：[phone]，E-mail：[e-mail]，其保藏號為CCTCC NO：M209075。

背景技術(shù):

功能性消化不良(FD)是一種在世界范圍內(nèi)非常普遍的胃腸疾病。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)FD在西方國家的發(fā)病率約為20-25％，在我國城市人口中消化不良的發(fā)病率也高達(dá)20％～54％。功能性消化不良是由胃和十二指腸功能紊亂引起的一組臨床癥狀并經(jīng)檢查排除同樣會出現(xiàn)上述癥狀的器質(zhì)性疾病，其癥狀主要以持續(xù)性或反復(fù)發(fā)作的上腹疼痛、餐后飽脹、上腹灼熱感或早飽之一種或多種并可能伴有食欲不振、噯氣、惡心、嘔吐等，在中醫(yī)學(xué)上屬于“痞滿”、“胃脘痛”、“積滯”。FD會使患者的生活質(zhì)量明顯下降且產(chǎn)生巨大的醫(yī)藥費用。FD的確切的病理生理機(jī)制至今尚不明確，許多研究表明其可能與胃腸道動力障礙、內(nèi)臟高敏感性、精神因素、神經(jīng)-內(nèi)分泌調(diào)節(jié)紊亂、幽門螺桿菌感染等多種因素有關(guān)。

目前對FD的治療藥物有化藥、中藥及生物酶類藥三類。化藥治療常以促胃腸動力藥物為主，多潘立酮等促胃腸動力藥雖然對FD的治療效果較好，然而其使用時會出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用如多潘立酮有出現(xiàn)嚴(yán)重室性心律失常和增加心源性猝死的風(fēng)險、西沙比利會導(dǎo)致罕見的嚴(yán)重的心率失常。中藥對FD的治療常會根據(jù)患者的病因機(jī)制不同，辯證服用不同治療藥物。生物酶類藥的主要成分是消化酶，多在人體內(nèi)就生理存在，一般對患者安全無毒副作用，在臨床上廣泛用于FD的治療。有文獻(xiàn)報道多種消化酶制劑較安慰劑對FD有更好的治療效果。

凝乳酶是一種能夠水解酪蛋白的酶，其與胃蛋白酶合用可以提高胃蛋白水解蛋白的能力。嬰兒體內(nèi)凝乳酶含量較多，它可使進(jìn)入嬰兒胃內(nèi)的母乳變成半固體，增加在胃內(nèi)的存留時間，使母乳可以得到充分的吸收，此外還可以防止嬰兒吐奶。另外凝乳酶與胃蛋白酶結(jié)合能加快蛋白質(zhì)分解，促進(jìn)黏蛋白生成，緩解胃炎產(chǎn)生的消化不良癥狀。

復(fù)合凝乳酶膠囊，它是一種由羔綿羊胃提取物制成的生物酶類藥物，其藥效成分主要是羔綿羊凝乳酶和胃蛋白酶。許多研究表明其可以治療功能性消化不良，然而其存在原料藥羔羊胃來源有限、蛋白水解譜窄、療效緩慢、成本高等缺點，亟須尋找一種成本低、原料來源廣泛及治療效果更好的蛋白消化酶酶類藥物。

本發(fā)明專利研究發(fā)現(xiàn)了一株高產(chǎn)凝乳酶的Bacillus subtilis YB-3菌株，其分泌的凝乳酶YS-1不僅對α-casein具有較強(qiáng)的蛋白水解活性外，對β-casein和κ-casein也有較強(qiáng)的蛋白水解活性，相比之下，動物源的凝乳酶對β-casein幾乎無水解作用。因此該凝乳酶不僅水解譜寬而且生產(chǎn)成本低，很有可能成為復(fù)合凝乳酶膠囊中動物源凝乳酶的替代品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開一種凝乳酶YS-1，該凝乳酶YS-1是由枯草芽孢桿菌YB-3菌株(Bacillus subtilis YB-3)分泌而成，枯草芽孢桿菌YB-3菌株現(xiàn)已于2009年4月17日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號是CCTCC：M209075，該菌能分泌凝乳酶YS-1。

本方法公開一種凝乳酶YS-1的應(yīng)用，該酶可用于治療功能性消化不良。

本發(fā)明還提供凝乳酶YS-1的制備方法：

(1)將枯草芽孢桿菌YB-3菌株在搖瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)基為種子培養(yǎng)基；種子接種量為1.67％v/v、搖瓶裝液量為6％v/v；種子培養(yǎng)基主要是由牛肉浸膏6.37g/L，酪蛋白11.07g/L，硫酸鎂1.14g/L，氯化鈉1.0g/L，磷酸氫二鈉1.0g/L，酵母浸膏0.2g/L組成，pH7.0轉(zhuǎn)速200rpm，溫度為37℃、培養(yǎng)12h；

(2)將培養(yǎng)液離心去除菌體，取上清液，濃縮后得到濃縮液，備用；上清液的濃縮使用0.22μm和10kDa的中空纖維柱；

(3)對上述濃縮液進(jìn)行乙醇分級沉淀，離心收集沉淀，復(fù)溶，干燥，研磨后得到凝乳酶YS-1；分級沉淀時選取20-60％乙醇濃度；干燥時采用40℃常壓干燥。

實驗結(jié)果顯示，與市售復(fù)合凝乳酶膠囊相比，本發(fā)明公開的凝乳酶YS-1不僅對功能性消化不良具有相同的治療效果，而且具有更低的生產(chǎn)成本，和更簡單的制備流程，可用于制備治療功能性消化不良的藥物。

具體實施方式