[發(fā)明專利]一種蚜蟲胚胎觀察處理方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610145313.5
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105717032B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張廷偉;劉長仲;王國利
• 申請（專利權(quán)）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10;G01N1/28;G01N21/84
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 談杰

本發(fā)明公開一種蚜蟲胚胎觀察處理方法，使用全新配制的觀察液，該觀察液中能使卵巢管壁膜組織增強韌性胚胎不易散落、能使胚胎和細胞中的蛋白沉淀增強視覺效果，從而防止了原有技術(shù)使用中出現(xiàn)的卵巢管中胚胎易散落、細胞溶酶體自溶作用造成的無法計數(shù)和模糊不清的問題，為以后蚜蟲生殖特性差異研究奠定基礎(chǔ)。該方法安全、簡單、作用速度快，效果明顯；對于研究觀察中在缺乏特殊成像系統(tǒng)的設(shè)備的研究者或研究單位，利用此方法借助普通體視解剖鏡即可完成對蚜蟲卵巢管數(shù)以及每條卵巢管中胚胎數(shù)目的計數(shù)觀察。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蚜蟲胚胎觀察處理方法。

背景技術(shù)

蚜蟲是一個典型的研究生態(tài)學(xué)、發(fā)育學(xué)和進化學(xué)問題的模式昆蟲類群，尤其2010年國際蚜蟲基因組聯(lián)盟對豌豆蚜全基因組序列測定后，為進一步研究進化生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)問題提供了其它生物無可比擬的條件。蚜蟲多型現(xiàn)象非常普遍，不僅具有色型和翅型分化，而且還具有生殖多型現(xiàn)象。孤雌生殖和有性生殖是蚜蟲的兩種繁殖方式。全世界至今已知5000種蚜蟲都以孤雌生殖作為其年生活史當(dāng)中主要的繁殖方式。因孤雌生殖繁殖速度快，世代周期短，世代數(shù)目多，導(dǎo)致蚜蟲分布廣泛、種群數(shù)量大、危害嚴重，也是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，蚜害問題難以解決的根本原因。

昆蟲的生殖系統(tǒng)與昆蟲的生殖密切相關(guān)。蚜蟲種群數(shù)量的大小取決于其生殖力的大小，而卵巢小管數(shù)目和每個卵巢管中所產(chǎn)生的胚胎數(shù)是衡量蚜蟲潛在生殖力的重要參數(shù)，而潛在生殖力是決定蚜蟲種群數(shù)量大小的重要影響因子。對蚜蟲胚胎學(xué)的研究，有助于了解蚜蟲胚胎的形成過程和個體不同發(fā)育時期對生殖系統(tǒng)的影響、有助于了解同種蚜蟲不同生物型的生殖和生態(tài)功能的差異、有助于了解不同種蚜蟲生物學(xué)差異、有助于了解不同環(huán)境條件對蚜蟲生殖發(fā)育的影響，有助于了解蚜蟲不同地理種群的生物學(xué)差異，從而為研究生物進化和蚜蟲的致災(zāi)機理奠定基礎(chǔ)。而現(xiàn)在并沒有一種用于觀察蚜蟲胚胎蚜蟲胚胎的觀察液和處理方法，蚜蟲胚胎的觀察手段依舊比較落后。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，避免因為使用溶液的滲透作用導(dǎo)致的胚胎吸漲造成的卵巢管破裂和不完整性，以及胚胎組織內(nèi)源性溶酶體酶對自身組織和細胞的自溶作用造成的視覺模糊和成像不清楚的缺陷,以及溶液溶劑蒸發(fā)導(dǎo)致的鹽漬問題；本發(fā)明提供了一種簡單有效的胚胎組織處理方法，通過本方法可以簡便有效的觀察和計數(shù)，同時有利于成像。

為達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一、觀察液的配制

(1)觀察液配比為：醇類10-30份；乙酸乙酯1-5份；油類1-5份。

進一步的，觀察液配比為：無水乙醇20份，乙酸乙酯1份，甘油1份。

進一步的，觀察液制備方法為：

步驟一：常溫常壓下，使用移液器取無水乙醇20份，乙酸乙酯1份，甘油1份置入廣口瓶中。

步驟二：將步驟一所述混合液搖勻，置于常溫密封干燥條件下保存。

(2)具體制備方法

二、一種簡單有效的蚜蟲胚胎學(xué)組織觀察處理方法，包括如下步驟：

(1)在凹形載玻片上使用滴管滴一滴蒸餾水，將一頭不同齡期的無翅或有翅蚜蟲用細毛筆移入凹形載玻片水中，以防止蚜蟲逃逸；備用。

(2)在雙目體視解剖鏡下，用兩支0號昆蟲針將蚜蟲腹面朝上，一個昆蟲針固定于蚜蟲中胸腹板，另一只昆蟲針沿腹部中央從前往后將蚜蟲腹部腹面輕輕剖開，用昆蟲針摁住生殖腹板將卵巢全部拉出，去除母體蟲殼等雜物。

(3)滴加2滴配制好的觀察液，將胚胎組織完全浸沒，立刻就會使卵巢管和胚胎的輪廓更加清晰，視覺效果提升。

(4)在雙目解剖鏡下即可計數(shù)卵巢管及每管胚胎數(shù)或在成像系統(tǒng)下照相。

本發(fā)明的有益效果：