[發(fā)明專利]雞匍匐性狀基因及與雞匍匐性狀相關(guān)的DNA分子標(biāo)記

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610144985.4
• 申請(qǐng)日: 2016-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN105671174B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊寧;金四華;侯卓成;朱峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11;C12N15/12
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發(fā)明涉及雞匍匐性狀基因及與雞匍匐性狀相關(guān)的DNA分子標(biāo)記。所述分子標(biāo)記位于雞7號(hào)染色體上，用于擴(kuò)增該DNA分子標(biāo)記的引物如SEQ ID NO:1?2所示。本發(fā)明還首次鑒定了雞匍匐性狀的關(guān)鍵基因和原因突變，即由IHH基因的半合子缺失引起，該缺失位點(diǎn)位于chr7:21798705?21810600(Ensembl，Galgal 4版本)，該缺失區(qū)域包含唯一的目的基因IHH，該基因的全部缺失，導(dǎo)致胚胎的早期致死。本發(fā)明克隆獲得了雞匍匐性狀基因，該基因及其檢測引物對(duì)雞匍匐性狀形成機(jī)理的深入研究以及地方雞種中篩查匍匐性狀基因以及匍匐型雞品種資源保護(hù)、研究和改良工作具有重要的意義，還能夠促進(jìn)人類和其他脊椎動(dòng)物的肢體發(fā)育機(jī)理的深入研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程及雞遺傳育種領(lǐng)域，具體地說，涉及雞匍匐性狀基因及與雞匍匐性狀相關(guān)的DNA分子標(biāo)記。

背景技術(shù)

矮小型是脊椎動(dòng)物的一種常見的異常肢表型，不同的物種具有相似的表型。矮小表型由相應(yīng)的基因控制，包括性染色體矮小基因和常染色體矮小基因。匍匐性狀是雞品種中存在的一種特有的矮小表型，該表型主要特征為脛短身矮、翅膀短小。了解匍匐性狀形成的分子機(jī)理，對(duì)匍匐雞的保種和改良工作具有重要的意義，也為人類和其他物種的肢體發(fā)育提供參考和借鑒。

Landauer和Dunn(1930)提出匍匐性狀是由常染色體上的顯性純合致死基因(Cp)控制的質(zhì)量性狀，雜合子個(gè)體表現(xiàn)匍匐性狀，顯性純合子表現(xiàn)為致死型，胚胎死亡集中在孵化的第4天，孵化早期死亡率為25％，后代中雜合子的成活率基本不受影響，但由于軟骨營養(yǎng)不良，引起發(fā)育遲緩，導(dǎo)致脛骨變短，表現(xiàn)為匍匐性狀。國際上對(duì)匍匐性狀的研究已有近90年的研究歷史，研究學(xué)者從形態(tài)學(xué)、解剖學(xué)、細(xì)胞學(xué)和分子水平對(duì)匍匐性狀雞胚胎進(jìn)行了相關(guān)的研究。早期的研究嘗試用物理指標(biāo)來判斷胚胎的分離表型，該研究通過早期胚胎24-25h、48-54h的體節(jié)計(jì)數(shù)的方法或者形態(tài)學(xué)的方法來確認(rèn)體節(jié)數(shù)目以區(qū)分純合致死胚胎、雜合胚胎和正常胚胎。前人研究也表明Cp胚胎軟骨發(fā)育不正常、引起發(fā)育阻滯。另外，Loewenthal(1957)通過對(duì)Cp胚胎和正常胚胎的組織學(xué)及組化分析，把胚胎利用海利氏固定液(Helly’sfluid)進(jìn)行固定，然后進(jìn)行不同染色來觀察Cp胚胎與正常型胚胎的差異，結(jié)果表明Cp純合胚胎與正常型胚胎的Feulgen染色以及胞質(zhì)嗜堿性均顯著不同。Wallace等(1969)通過核酸測定研究表明Cp胚胎與正常型胚胎也存在有顯著差異。此外，研究者對(duì)Cp胚胎的細(xì)胞培養(yǎng)以及軟骨發(fā)育也進(jìn)行了相關(guān)研究。但這些區(qū)分胚胎表型的方法操作復(fù)雜、費(fèi)用高、耗時(shí)長、需要有專門的儀器，在生產(chǎn)中很難大規(guī)模推廣應(yīng)用。因此，開發(fā)一種利用分子標(biāo)記進(jìn)行匍匐性狀準(zhǔn)確的的檢測方法具有重要的意義。

匍匐性狀是一些地方雞種特有的表型，是雞中特有的肢體異常表型。匍匐性狀個(gè)體由于骨骼發(fā)育異常，引起發(fā)育遲緩、脛骨變短，翅膀變小、身體矮小。匍匐性狀由常染色體上顯性純合致死基因Cp控制，因此Cp基因身份最有可能與控制機(jī)體骨骼發(fā)育的基因及其信號(hào)通路基因相關(guān)。興義矮腳雞是原產(chǎn)于我國貴州省的地方品種，具有脛短身矮、體軀勻稱、肉美味鮮，肉蛋兼用等特點(diǎn)，是一種稀有珍貴的家禽遺傳資源。由于該品種具有特殊的匍匐性狀而受到廣泛的關(guān)注，但是存在孵化率低、脛長不一致、個(gè)體體重差異較大、腳趾畸形等發(fā)育問題，米易等一些地方雞種也由于攜帶該基因嚴(yán)重影響這些地方品種的孵化率和生長發(fā)育的整齊度。因此，只有克隆得到Cp基因，才能從根本上解決育種中存在的這些問題，才能更深入研究匍匐性狀形成的分子機(jī)理和地方雞種中篩查該基因。另外，雞作為一個(gè)動(dòng)物模型，Cp基因的研究也將會(huì)為人類和其他脊椎動(dòng)物肢體發(fā)育研究提供參考，也將促進(jìn)人類軟骨發(fā)育相關(guān)疾病的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種與雞匍匐性狀相關(guān)的DNA分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的是提供一種鑒定或輔助鑒定匍匐性狀雞的方法。

本發(fā)明的又一目的是提供雞匍匐性狀基因。