[發(fā)明專利]一種用于轉(zhuǎn)育優(yōu)良油菜溫敏不育系的分子標(biāo)記輔助選擇方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610144773.6 | 申請日： | 2016-03-14 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN105648091B | 公開（公告）日： | 2020-06-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 林良斌;唐天向;周筱妍;張傳利;唐偉杰;劉雅婷 | 申請（專利權(quán)）人： | 云南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6895 | 分類號(hào)： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 650201 云南省昆明*** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 優(yōu)良 油菜 不育 分子 標(biāo)記 輔助 選擇 方法 | ||
1.一種用于轉(zhuǎn)育優(yōu)良油菜溫敏不育系的分子標(biāo)記輔助選擇方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟①：采用CTAB法提取用于優(yōu)良油菜溫敏不育系選育的雜交后代單株的基因組DNA，并檢測DNA樣品的質(zhì)量；
步驟②：用連鎖的SSR標(biāo)記的正反向引物PCR擴(kuò)增所述步驟①中提取的基因組DNA，并用4％～8％的聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物；
步驟③：依據(jù)所述步驟②中的電泳檢測結(jié)果，將具有目標(biāo)帶的植株作為優(yōu)良油菜溫敏不育系進(jìn)一步選育的育種材料；
所述步驟②中連鎖標(biāo)記與目標(biāo)基因的連鎖距離為0.8～1cm；
所述步驟②中PCR擴(kuò)增時(shí)連鎖SSR標(biāo)記的正反向引物序列分別是5’-CTCTCCTGATCCTCTCCTTC-3’和5’-CTTGTAGAGAACCCGAAC TG-3’；
所述步驟③中將目標(biāo)帶大小為550bp的植株作為優(yōu)良油菜溫敏不育系進(jìn)一步選育的育種材料。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用于轉(zhuǎn)育優(yōu)良油菜溫敏不育系的分子標(biāo)記輔助選擇方法，其特征在于，所述步驟②中PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為：10×PCR緩沖液1.0～3.0μl，濃度為25mmol/L的MgCl2溶液2.0～3.0μl，濃度為2.5mmol/L的脫氧核苷酸溶液0.3～0.7μl，濃度為5U/μl的Taq酶0.7～0.9μl，濃度為10mmol/L的正反向引物各0.3～0.7μl，2～6μl的DNA，加ddH2O至10.0～30.0μl。
3.如權(quán)利要求1所述的一種用于轉(zhuǎn)育優(yōu)良油菜溫敏不育系的分子標(biāo)記輔助選擇方法，其特征在于，所述步驟②中的PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，55℃退火1min，72℃延伸1.5min，35個(gè)循環(huán)；72℃終延伸10min，4℃保存。
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